Karina Fittipaldi Bombonato Prado.

A osteoporose é uma doença crônica e debilitante, que representa um dos maiores desafios à saúde, nas últimas décadas, afetando principalmente mulheres na pré-menopausa e idosos. O tratamento atual para esta doença é a reposição hormonal do estrógeno, mas esse pode causar diversos efeitos colaterais como desenvolvimento de câncer e doenças cardiovasculares. Entretanto, uma alternativa para realizar o tratamento da osteoporose seria o uso de substâncias estratégicas não farmacológicas de origem nutricional, como o Crocus sativus, composto por safranal e crocetina, conhecido popularmente como Açafrão-verdadeiro, com grande potencial antioxidante e anti-inflamatório. Nesse sentido, esse trabalho tem como objetivo analisar in vivo, se o Crocus sativus é capaz de estimular manter a remodelação óssea e minimizar a perda de tecido ósseo em ratas com osteoporose. Para este fim, utilizaremos 36 ratas Wistar Hannover fêmeas divididas em 4 grupos: sham, sham + administração de 50mg/kg Crocus sativus (SHAM/CS), grupo ovariectomizado (OVX) e ovariectomizado + 50mg/kg Crocus sativus (OVX/CS). O Crocus sativus e a água serão administrados por sonda gástrica por 3 meses, 3 vezes por semana. Depois desse período, será retiradas a mandíbula para a produção de lâmina histológicas para análise qualitativa e quantitativa. Os parâmetros a serem avaliados serão análise qualitativa e quantitativa da remodelação óssea do corpo e do processo alveolar mandibular, com quantificação de trabéculas ósseas e osteócitos. Todos os dados quantitativos serão submetidos por análise estatística adequada para p<0.05.

O projeto, intitulado Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Biofotônica Translacional em Odontologia (INCT-Biofoto Bucal), é coordenado pela Professora Manoela Domingues Martins, da Faculdade de Odontologia da UFRGS. Destaca-se que este é o primeiro INCT na área de Odontologia liderado por uma mulher, ressaltando o papel fundamental das mulheres na ciência. A Professora Manoela é uma das principais referências femininas na odontologia científica atual. A iniciativa envolve pesquisadores nacionais e estrangeiros e alunos de pós-graduação.O principal objetivo do INCT-BIOFOTO ODO é integrar tecnologias avançadas de biofotônica à saúde bucal, promovendo o desenvolvimento translacional da pesquisa laboratorial à aplicação clínica para diagnóstico precoce e terapias inovadoras, menos invasivas e mais eficazes. O instituto focará na produção científica de alto nível para diagnosticar precocemente e tratar condições como cárie, doença periodontal e peri-implantar, mucosite oral, xerostomia, disfunção temporomandibular, dor orofacial, lesões potencialmente malignas e câncer bucal. Além de fortalecer a colaboração entre universidades, hospitais do SUS e a indústria, o INCT-BIOFOTO ODO busca facilitar a transferência de conhecimento e a implementação de tecnologias baseadas em luz. Também pretende capacitar profissionais, impulsionar a ciência brasileira e consolidar o Brasil como referência global em pesquisa translacional e aplicação da biofotônica na odontologia.

O Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia (INCT) propõe uma abordagem interdisciplinar e transdisciplinar voltada à integração de Inteligência Artificial, transformação digital e saúde mental, alinhando-se aos temas estratégicos prioritários nacionais. O projeto busca fortalecer o Complexo Econômico-Industrial da Saúde e promover a inovação científica e tecnológica por meio do desenvolvimento de soluções avançadas e metodologias emergentes para desafios complexos do país.A iniciativa apresenta alto grau de inovação, com potencial de impacto científico, tecnológico, econômico e social, contribuindo para a geração de novos conhecimentos, otimização de políticas públicas em saúde e estímulo a cadeias produtivas sustentáveis. Conta com estrutura operacional e modelo de gestão robustos, integrando instituições e equipes altamente qualificadas, além de mecanismos eficientes de governança, acompanhamento e avaliação.O INCT também prioriza a disseminação ampla do conhecimento, por meio de publicações científicas, eventos e mídias digitais, assegurando que seus resultados beneficiem tanto a comunidade acadêmica quanto a sociedade. Sua implementação representa uma contribuição estratégica para o avanço científico, tecnológico e social do Brasil.

Osteoporosis, a highly prevalent disease, involves pathogenesis linked to oxidative stress that disrupts bone homeostasis, leading to increased resorption and reduced deposition of mineralized matrix. Current osteoporosis treatments are often associated with significant side effects, underscoring the need for effective alternatives devoid of adverse reactions. Phytoestrogens, abundant in plants, offer promise as alternative osteoporosis therapies due to their estrogen-like effects, which enhance bone deposition, reduce resorption, and provide antioxidant protection against reactive oxygen species (ROS) induced by oxidative stress. Patients with osteoporosis face fractures necessitating prosthetic implants and replacements. This study aimed to evaluate the systemic effects of Vitex agnus-castus (VAC) extract on bone healing around implants in female rat tibiae subjected to an experimental osteoporosis model with and without controlled loading. Ovariectomized rats were divided into four groups: 1) Control (SHAM), 2) Control with VAC administration (VAC + SHAM), 3) Ovariectomy (OVX), and 2) Ovariectomy with VAC administration (VAC + OVX). Rats received oral VAC three times a week for 28 days. Implants were placed in the tibiae 14 days after starting VAC treatment, with micromotion applied for 7 days. Groups were subdivided into: a) No load application; b) 1.5 N once daily; c) 1.5 N twice daily. Animals were euthanized 7 days after micromotion cessation (day 28), and tibiae were analyzed using histomorphometry and RNA sequencing. Statistical analysis was performed with a significance level of p<0.05. There was no difference when the force was applied only once a day; however, applying it twice a day caused a significant difference, especially in the distance between the bone and the implant surface and cartilage formation between threads. Overall, gavage with VAC did not alter the observed conditions, regardless of the presence or absence of osteoporosis.

Um dos cenários da ciência moderna que mais tem se destacado é a medicina regenerativa. A regeneração de tecidos lesionados pode ser feita através da combinação de células e biomateriais que agem como suportes para a arquitetura celular, direcionando o crescimento do novo tecido. Esses biomateriais precisam ser biocompatíveis e bioativos. Biomateriais a base de colágeno são uma escolha muito promissora pois oferecem suporte para adesão celular, propriedades mecânicas controláveis e menor risco de reações imunes. Infelizmente, porém, a maioria dos colágenos disponíveis no mercado são de origem animal, sendo inseguros para aplicações em humanos. Um dos grandes nichos que tem se expandido em estudos regenerativos é a endodontia regenerativa, onde a importância do colágeno também tem sido observada, e em que estudos relatam a utilização do colágeno I como biomaterial estimulador de células da polpa dentária. A matriz extracelular desenvolvida de forma disruptiva pela Quantis/Bioinn, o QMatrix, é composta principalmente de colágeno tipo I produzido por células humanas primárias e sem modificação genética, sendo, portanto, o produto final considerado bioidêntico ao humano. Além disso, todos os insumos são animal-free e o processo de obtenção não possui componentes químicos ou enzimáticos, o que possibilita um produto mais puro, sem riscos de contaminação microbiológica, química ou enzimática. Dado seu alto grau de pureza e biocompatibilidade, este colágeno pode ser o objeto de estudo ideal para aplicações na endodontia regenerativa. O potencial bioestimulador do QMatrix já foi verificado em testes preliminares onde observou-se um aumento da proliferação celular e viabilidade celular de fibroblastos humanos, indicando a possibilidade da matriz exercer efeitos de regeneração tecidual através da estimulação celular. Este projeto visa através de novos testes in vitro validar o potencial do QMatrix como biomaterial estimulador, expandindo o escopo de atuação da Quantis e entrando no campo de estudos regenerativos através de aplicações odontológicas, visando no futuro, possíveis testes em pacientes. O fato da empresa já possuir colaborações e parcerias de pesquisa com diversos institutos e universidades dentro e fora do país é um grande catalisador para esse projeto, pois já estão sendo desenvolvidos diversos estudos em diferentes modelos celulares e aplicações in vitro com o QMatrix. Porém há o objetivo de expandir estrategicamente o portfólio de casos de uso de curto prazo do QMatrix e, principalmente, realizar os primeiros testes focando na endodontia regenerativa como porta de entrada para possíveis aplicações maiores de engenharia tecidual e medicina regenerativa.

A osteoporose é uma doença multifatorial de alta prevalência na população, sendo que sua patogênese pode resultar de diferentes fatores como uso de medicamentos, consumo de álcool, fatores genéticos, envelhecimento e deficiências hormonais, trazendo um desequilíbrio no sistema de remodelação óssea resultando em maior reabsorção do que sua formação. A associação entre este desequilíbrio com a deficiência estrogênica que ocorre em mulheres na fase da menopausa ainda é muito investigada, sugerindo-se que a redução na produção de estrógeno pelo próprio organismo após a menopausa favoreça o estresse oxidativo com consequente alteração na atividade funcional das células ósseas. Diversos são os tratamentos atuais para a osteoporose, mas os mesmos se caracterizam pela alta incidência de efeitos colaterais indesejáveis, o que leva ao aumento da busca por terapias alternativas que sejam eficazes, mas que ao mesmo tempo não tragam tais prejuízos ao organismo. Evidências mostram que os fitoestrógenos, encontrados em abundância no reino vegetal, possam ser usados como alternativas de tratamento para a osteoporose pós-menopausa por sua capacidade de se ligar a receptores de estrógeno no organismo, o que levaria à um aumentando na taxa de deposição e reduzindo a taxa de reabsorção óssea, além de possuir efeito antioxidante, atuando de forma a proteger as células contra os efeitos causados pelas espécies reativas de oxigênio (EROs) produzidas pelo estresse oxidativo nesta condição. Sendo assim, a proposta do presente trabalho foi avaliar o efeito de dois fitoestrógenos, Vitex agnus-castus (VAC) (popularmente usado no tratamento de sintomas pré-menstruais) e extrato de pitaya (EPY) (rico em flavonoides e outros compostos com potencial ação como fitoestrógeno) com análises in vivo e in vitro, comparado ao #946;-estradiol (E2), na função osteogênica de células osteoblásticas na presença e ausência de estresse oxidativo e na perda óssea em ratas submetidas a um modelo experimental de osteoporose. Para a análise in vitro, células da linhagem osteoblástica MC3T3-E1 e da medula óssea do fêmur dos animais foram cultivadas e divididas em grupos controle e grupos com indução in vitro de estresse oxidativo. Esses dois grupos, por sua vez, foram subdivididos em quatro grupos: i) Grupo sem tratamento; ii) Grupo com adição de 10-8 mol.L-1 de #946;-estradiol; iii) Grupo com adição de 80 #956;g/mL VAC; iv) Grupo com adição de 1 #956;g/mL EPY. Os grupos celulares foram submetidos a ensaios bioquímicos e de biologia molecular, como análise da proliferação celular (MTT), detecção e quantificação da enzima fosfatase alcalina e de nódulos mineralizados, além da detecção intracelular de EROs e análise da expressão de genes relacionados à osteogênese e ao estresse oxidativo. As células mesenquimais da medula óssea do fêmur foram utilizadas para testes de mineralização. Para análise in vivo ratas Sprague-Dawley foram divididas em grupo controle (SHAM) e grupo com indução de osteoporose experimental. Esses dois grupos foram subdivididos em quatro grupos: i) Administração de água; ii) Administração de 20 #956;g/mL de #946;-estradiol; iii) Administração de 200 mg/mL VAC; iv) Administração de 200 mg/mL de EPY. Essa administração ocorrerá imediatamente após a ovariectomia por 12 semanas e então foi realizada a eutanásia e coleta de material que, por sua vez, foi submetido à análise histológica qualitativa e quantitativa do tecido ósseo e conjuntivo, assim como à análise microtomográfica e de histometria dinâmica do tecido ósseo, através de fluorocromos, para estudo da microarquitetura óssea. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente pelo software Graph Pad Prism 5.0 com nível de significância de 5.

A osteoporose é uma doença multifatorial de alta prevalência na população, sendo que sua patogênese pode resultar de diferentes fatores como uso de medicamentos, consumo de álcool, fatores genéticos, envelhecimento e deficiências hormonais, trazendo um desequilíbrio no sistema de remodelação óssea resultando em maior reabsorção do que sua formação. A associação entre este desequilíbrio com a deficiência estrogênica que ocorre em mulheres na fase da menopausa ainda é muito investigada, sugerindo-se que a redução na produção de estrógeno pelo próprio organismo após a menopausa favoreça o estresse oxidativo com consequente alteração na atividade funcional das células ósseas. Diversos são os tratamentos atuais para a osteoporose, mas os mesmos se caracterizam pela alta incidência de efeitos colaterais indesejáveis, o que leva ao aumento da busca por terapias alternativas que sejam eficazes, mas que ao mesmo tempo não tragam tais prejuízos ao organismo. Evidências mostram que os fitoestrógenos, encontrados em abundância no reino vegetal, possam ser usados como alternativas de tratamento para a osteoporose pós-menopausa por sua capacidade de se ligar a receptores de estrógeno no organismo, o que levaria à um aumentando na taxa de deposição e reduzindo a taxa de reabsorção óssea, além de possuir efeito antioxidante, atuando de forma a proteger as células contra os efeitos causados pelas espécies reativas de oxigênio (EROs) produzidas pelo estresse oxidativo nesta condição. Sendo assim, a proposta do presente trabalho foi avaliar o efeito de dois fitoestrógenos, Vitex agnus-castus (VAC) (popularmente usado no tratamento de sintomas pré-menstruais) e extrato de pitaya (EPY) (rico em flavonoides e outros compostos com potencial ação como fitoestrógeno) com análises in vivo e in vitro, comparado ao #946;-estradiol (E2), na função osteogênica de células osteoblásticas na presença e ausência de estresse oxidativo e na perda óssea em ratas submetidas a um modelo experimental de osteoporose. Para a análise in vitro, células da linhagem osteoblástica MC3T3-E1 e da medula óssea do fêmur dos animais foram cultivadas e divididas em grupos controle e grupos com indução in vitro de estresse oxidativo. Esses dois grupos, por sua vez, foram subdivididos em quatro grupos: i) Grupo sem tratamento; ii) Grupo com adição de 10-8 mol.L-1 de #946;-estradiol; iii) Grupo com adição de 80 #956;g/mL VAC; iv) Grupo com adição de 1 #956;g/mL EPY. Os grupos celulares foram submetidos a ensaios bioquímicos e de biologia molecular, como análise da proliferação celular (MTT), detecção e quantificação da enzima fosfatase alcalina e de nódulos mineralizados, além da detecção intracelular de EROs e análise da expressão de genes relacionados à osteogênese e ao estresse oxidativo. As células mesenquimais da medula óssea do fêmur foram utilizadas para testes de mineralização. Para análise in vivo ratas Sprague-Dawley foram divididas em grupo controle (SHAM) e grupo com indução de osteoporose experimental. Esses dois grupos foram subdivididos em quatro grupos: i) Administração de água; ii) Administração de 20 #956;g/mL de #946;-estradiol; iii) Administração de 200 mg/mL VAC; iv) Administração de 200 mg/mL de EPY. Essa administração ocorrerá imediatamente após a ovariectomia por 12 semanas e então foi realizada a eutanásia e coleta de material que, por sua vez, foi submetido à análise histológica qualitativa e quantitativa do tecido ósseo e conjuntivo, assim como à análise microtomográfica e de histometria dinâmica do tecido ósseo, através de fluorocromos, para estudo da microarquitetura óssea. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente pelo software Graph Pad Prism 5.0 com nível de significância de 5.

Este proyecto está enmarcado en la convocatoria del Sistema General de Regalías para el avance de la ciencia y la creación a través de Colciencias; se hará una unión estratégica con la empresa APISRED SAS del Departamento del Huila para el desarrollo de productos a base de propóleos para evaluar sus efectos sobre el control metabólico de la diabetes, pérdida de peso, efecto antihipertensivo y control del colesterol y adicionalmente sus efectos sobre procesos inflamatorios e infecciones como la enfermedad periodontal altamente asociada al control metabólico del paciente diabético. Se desarrollará un sistema de liberación controlada de propóleos y sus fracciones con alto efecto anti-inflamatorio y antioxidante para su evaluación en modelos celulares y en ratas con diabetes inducida como modelo experimental. Se espera obtener productos con potencial nutracéutico y/o fitoterapéutico para iniciar estudios en humanos con fines de comercialización.

O gene Autoimmune regulator (Aire) (cromossomo 21q22.3 humano e 10qC1 murino Mus musculus), é um controlador da tolerância imunológica central e do surgimento de doenças autoimunes. Aire apresenta ~80% de similaridade homem-camundongo e regula a transcrição de genes de autoantígenos de tecidos periféricos (PTAs do inglês peripheral tissue antigens) em células tímicas epiteliais medulares (mTECs do inglês medullary thymic epitelial cells). Esse fenômeno foi denominado de PGE (do inglês promiscuous gene expression.). O significado da PGE é imunológico, ou seja, a representação do próprio no timo, o que leva à seleção negativa de timócitos autoreativos. Já foram descritas mais de 100 mutações recessivas no gene Aire humano, muitas das quais estão associadas a manifestações da síndrome autoimune poli glandular do tipo 1 (APS1) (associação genótipo-fenótipo) (OMIM # 240300). A proteína Aire funciona em conjunto com vários &quot;parceiros&quot; (ex. DNA-PK, Sirt1 ...) na etapa de elongação da transcrição liberando a RNA Pol II ancorada às regiões promotoras de PTAs e de outros genes. Os genes controlados por Aire são referidos como Aire-dependentes. Recentemente, descobriram que o gene Fezf2 controla, no timo, a expressão de outro conjunto de genes de PTAs (Fezf2-dependentes). Nosso grupo trabalha com a expressão de Aire e PGE em células mTEC murinas e já evidenciamos que variações na expressão de Aire estão associadas a mudanças na PGE, no controle pós-transcricional de PTAs e no surgimento de diabetes autoimune do tipo 1 em camundongos NOD. Além disso, atribuímos duas &quot;novas&quot; funções ao gene Aire: 1) regulação da expressão de microRNAs (miRNAs) em mTECs e 2) controle da adesão mTECs-timócitos. Além disso, observamos algumas propriedades interessantes das mTECs: 1) quando essas células são cultivadas junto com timócitos (co-cultura como sistema modelo da adesão mTECs-timócitos), há aumento na expressão de Aire e também de CD80, MHC-II e Fezf2 e 2) a indução de mutação no exon 3 de Aire por meio do sistema CRISPR-Cas9 perturba o aparecimento da proteína Aire no núcleo das células mTEC e além disso, diminui a adesão dessas células com timócitos. Estes achados abriram perspectivas importantes para entendermos melhor a biologia das células mTEC e explorar pontos ainda elusivos. Por isso, formulamos as seguintes hipóteses: 1) a adesão mTECs-timócitos altera o transcriptoma das mTECs, incluindo os mRNAs e miRNAs e 2) mutações pontuais em Aire (variantes naturais), as mesmas encontradas em pacientes com APS1 (Aire domínio PHD no exon 7), podem alterar a conformação estrutural da proteína Aire. Tais alterações, principalmente as mutações missense, poderão ter um reflexo funcional nas células mTEC, por ex. alteração do transcriptoma e/ou da adesão mTECs-timócitos e/ou a migração de timócitos em direção às mTECs. Neste projeto, faremos uso de RNA-Seq e microarrays e dos sistemas modelo de adesão mTECs-timócitos (modelo murino) e de migração transwell timócitos à mTECs para testarmos essas hipóteses. A inovação tecnológica do projeto é a utilização do sistema CRISPR-Cas9 para indução de mutações &quot;humanas&quot; no gene Aire em células mTEC murinas. Selecionaremos clones de mTEC Aire mutantes para avaliarmos a expressão desse gene, a modulação do transcriptoma (mRNAs e miRNAs) por meio de RNA-Seq e/ou por microarrays. Com a modelagem in silico das proteínas Aire mutantes avaliaremos o efeito das mutações na relação estrutura-função. A inovação científica se dará em dois níveis: 1) a resposta transcricional (mRNAs e miRNAs) de mTECs quando essas aderem a timócitos e 2) como as mutações de Aire alteram a conformação da sua proteína e se estas alterações poderiam ser relacionadas, mesmo que indiretamente, com a adesão mTECs-timócitos, que é o ponto chave da seleção negativa, da tolerância imunológica central e da prevenção de doenças autoimunes.

O osso é um tecido com grande capacidade de regeneração, mas em algumas situações a extensão da injúria impede o reparo do tecido. Nesse cenário, a terapia celular utilizando células-tronco mesenquimais (do Inglês, mesenchymal stem cells - MSCs) tem atraído a atenção de diversos grupos de pesquisa por ser uma alternativa promissora em relação aos tratamentos existentes. No entanto, diversos aspectos moleculares, celulares e teciduais, ainda não abordados na literatura, necessitam ser investigados para tornar essa terapia um tratamento efetivo para a regeneração de defeitos ósseos em pacientes saudáveis ou acometidos por doenças sistêmicas que afetam o processo de reparo ósseo, como a osteoporose, a diabetes mellitus e a hipertensão. Nesse contexto, o presente projeto é composto por três subprojetos, cujos objetivos são: (1) investigar o potencial de MSCs derivadas de medula óssea (do Inglês, bone marrow - BM-MSCs) e de tecido adiposo (do Inglês, adipose tissue - AT-MSCs), tratadas com fator de crescimento do endotélio vascular A (do Inglês, vascular endothelial growth fator A - VEGF-A) e/ou proteína óssea morfogenética 9 (do Inglês, bone morphogenetic protein 9 - BMP-9) para regenerar o tecido ósseo; (2) investigar o potencial dessas MSCs modificadas geneticamente para sobre-expressar VEGF-A e/ou BMP-9 para regenerar o tecido ósseo e (3) avaliar a influência de BM-MSCs obtidas de ratos saudáveis sobre a diferenciação osteoblástica de BM-MSCs obtidas de ratos osteoporóticos, diabéticos e hipertensos. Para o desenvolvimento dos subprojetos 1 e 2, BM-MSCs e AT-MSCs serão tratadas com VEGF-A e/ou BMP-9 ou modificadas geneticamente utilizando agrupados de curtas repetições palindrômicas regularmente interespaçadas (CRISPR-Cas9) para sobre-expressar VEGF-A e/ou BMP-9. Essas células serão caracterizadas in vitro quanto ao potencial angiogênico e osteogênico e à expressão gênica e proteica em larga escala. Para a regeneração do tecido ósseo, as BM-MSCs e AT-MSCs associadas ao VEGF-A e/ou BMP-9 ou modificadas para sobre-expressar VEGF-A e/ou BMP-9 serão injetadas diretamente em defeitos criados em calvárias de ratos. Inicialmente, o tempo de permanência das células nos defeitos ósseos será avaliado por luminescência, utilizando a injeção de células transfectadas com luciferase. Por até 4 semanas após a injeção de células, a progressão da formação de vasos sanguíneos e de tecido ósseo será avaliada por microtomografia computadorizada (micro-CT) in vivo. Ao final de 4 semanas, os animais serão eutanasiados e as amostras serão avaliadas por análise histológica. No subprojeto 3, será avaliada a influência de BM-MSCs obtidas de ratos saudáveis sobre a diferenciação osteoblástica de BM-MSCs obtidas de ratos osteoporóticos, diabéticos e hipertensos utilizando um modelo de co-cultura indireta. Trata-se de estudo in vitro, cujos resultados, poderão gerar desdobramentos durante o desenvolvimento do presente projeto, com vistas à aplicação das terapias abordadas nos subprojetos 1 e 2 para a investigação da regeneração óssea nos modelos de patologias abordados no subprojeto 3.

A doença periodontal e a osteoporose são doenças caracterizadas pela reabsorção óssea com uma alta prevalência a nível mundial. Pesquisas têm demonstrado associação entre estas duas doenças, por meio do aumento da perda de massa óssea sistêmica e desequilíbrio do sistema RANK-RANKL-OPG, desencadeando também a perda óssea alveolar. O chá verde é uma das bebidas mais comuns no mundo e de fácil acesso, havendo indícios de que a epigalocatequina-galato (EGCG), um flavonóide presente no seu extrato, poderia diminuir a perda óssea, em patologias como a osteoporose e a doença periodontal. Visando verificar seus possíveis efeitos e aplicá-los no tratamento e prevenção destas doenças, este projeto tem por objetivo avaliar por meio de parâmetros morfológicos, tomográficos, bioquímicos e moleculares, a influência do extrato de chá verde (GTE) na doença periodontal induzida por ligadura em ratas ovariectomizadas. Ratas Wistar serão ovariectomizadas e pareadas com controles sham. Imediatamente após a cirurgia, será realizada a administração por sonda gástrica de 50 mg/kg de extrato de chá verde (GTE) por 60 dias e indução da doença periodontal mediante ligadura 15 dias antes do sacrifício. Serão coletadas as mandíbulas e fêmures para análises histológica, microtomográfica e morfométrica. Além disso, as células osteoblásticas da mandíbula serão isoladas e cultivadas em meio osteogênico para a realização de ensaios bioquímicos e moleculares. As amostras serão divididas em 4 grupos: controle sham + doença periodontal (Cdp), ovariectomizado + doença periodontal (Odp), controle sham + doença periodontal + GTE (Cdp/gte) e ovariectomizado + doença periodontal + GTE (Odp/gte). Os resultados obtidos serão analisados por meio do software estatístico Sigma Plot com nível de significância em 5

O osso é um tecido com grande capacidade de regeneração, mas em algumas situações a extensão da injúria impede o reparo do tecido. Nesse cenário, a terapia celular tem atraído a atenção de diversos grupos de pesquisa por ser uma alternativa promissora em relação aos tratamentos existentes. No entanto, diversos aspectos moleculares, celulares e teciduais, ainda não abordados na literatura, necessitam ser investigados para tornar essa terapia um tratamento efetivo para a regeneração de defeitos ósseos. Sendo assim, os objetivos desse estudo são comparar as assinaturas moleculares e o potencial para regenerar o tecido ósseo de células-tronco mesenquimais (CTMs) e de osteoblastos. Para isso, CTMs serão obtidas de medula óssea (CTMs-MO) e de tecido adiposo (CTMs-TA) de ratos, expandidas in vitro e mantidas com características de CTMs ou diferenciadas em osteoblastos (OBs-MO e OBs-TA, respectivamente). As CTMs serão identificadas por imunofenotipagem por citometria de fluxo para os marcadores CD29, CD31, CD34, CD45, CD90 e CD106. A diferenciação osteoblástica será confirmada por avaliação da expressão gênica de Runx2, fosfatase alcalina e osteocalcina por PCR em tempo real. As assinaturas moleculares de CTMs-MO, CTMs-TA, OBs-MO e OBs-TA serão avaliada por análises em larga escala das expressões gênica (microarray) e proteica (proteômica). Para a regeneração do tecido ósseo, as células serão injetadas (injeção única x injeções repetidas) diretamente em defeitos criados em calvárias de ratos duas semanas antes da primeira injeção para mimetizar defeito ósseo sem capacidade de auto-regeneração. Inicialmente, o tempo de permanência de CTMs-MO, CTMs-TA, OBs-MO e OBs-TA nos defeitos ósseos será avaliado por bioluminescência utilizando a injeção de células transfectadas com luciferase. Dessa forma, será possível determinar o intervalo entre as injeções repetidas. Duas semanas após a criação dos defeitos ósseos, será realizada a primeira injeção de células e as injeções adicionais serão aplicadas no intervalo determinado no experimento anterior. Defeitos ósseos tratados com uma única injeção de células e com o veículo utilizado (solução salina tamponada com fosfato) sem células serão também avaliados. Seis semanas após a primeira injeção, os animais serão mortos e o tecido ósseo neoformado será avaliado por microtomografia computadorizada, análise histológica, PCR em tempo real e análise do módulo de elasticidade e da dureza. Os dados serão submetidos ao teste de aderência à curva normal para determinar o teste estatístico adequado. Os resultados desse estudo poderão estabelecer novos parâmetros com relação às características de células candidatas ao uso em terapia celular e à injeção de células para regenerar tecido ósseo, visto que, até o momento, não há na literatura estudos avaliando o efeito de injeções repetidas.

Projetos do Edital 2015 USP/U.PORTO- Parceria entre a Universidade de São Paulo&#10;e a Universidade do Porto

Sob a coordenação do Professor Jaime Hallak, o grupo de pesquisadores do LABNET, com a colaboração direta de outros centros componentes do INCT-TM, está na vanguarda da pesquisa sobre o envolvimento dos sistemas glutamatérgico e nitrérgico nas psicoses. Além disso, o centro da USP-RP também investiga os efeitos da ayahuasca no sistema nervoso central e no tratamento de transtornos psiquiátricos como a depressão e a ansiedade social. Por sua proximidade física e funcional com a Faculdade de Medicina, o HCFMRP-USP tem a peculiaridade única de congregar pesquisadores clínicos e cientistas básicos, contando com uma grande variedade de serviços e laboratórios envolvidos em diversas áreas da prática clínica e do conhecimento científico biomédico que estarão à disposição para desenvolver as atividades do INCT-TM com a sinergia necessária na pesquisa translacional. O grupo do Dep. Neurociências e Ciências do Comportamento também realizará estudo comportamental e molecular do potencial terapêutico da DMT em roedores e, no âmbito internacional, este grupo contará com a colaboração de pesquisadores da Universidade Autônoma de Barcelona, Espanha (Prof. Dr. Jordi Riba), um dos principais centros mundiais de pesquisa sobre a psicofarmacologia humana da ayahuasca. Ademais, estudos pré-clínicos de toxicologia do desenvolvimento e cardiovascular da ayahuasca estão em andamento em parceria com a Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (Profa. Dra. Simone Hallak Regalo, Marisa Semprini, Selma Siéssere e Karina Fittipaldi Bombonato Prado). O grupo da Faculdade de Odontologia também desenvolverá projetos relacionados com doenças crônico-degenerativas..

Apesar do tecido ósseo apresentar potencial regenerativo, existem doenças que podem levar à perda óssea, como por exemplo, a osteoporose que compromete a resistência e a qualidade óssea, predispondo a fraturas. Assim, frente a esta e outras doenças, torna-se importante a busca de novas metodologias que objetivam a deposição óssea. Experimentos in vitro comparando a membrana obtida pela associação do polímero de poli(vinilideno-trifluoretileno) e da cerâmica de titanato de bário (P(VDF-TrFE)/BT) à membrana de politetrafluoretileno (PTFE) demonstraram resultados favoráveis à membrana de P(VDF-TrFE)/BT para as diferentes linhagens celulares estudadas: osteoblastos, fibroblastos e queratinócitos. Assim, este estudo tem como objetivo avaliar in vivo a resposta do tecido ósseo à membrana de P(VDF-TrFE)/BT e compará-la à membrana de PTFE (controle) em calvária de ratas Wistar com modelo experimental para osteoporose. Ratas Wistar (300g) serão submetidas a ovariectomia bilateral. Após 150 dias serão realizados defeitos ósseos (5 mm) na calvária e os animais serão distribuídos em três grupos com relação à utilização ou não de membranas nos defeitos ósseos: (Grupo 1) membrana de P(VDF-TrFE)/BT; (Grupo 2) membrana de PTFE; (Grupo 3) nenhum tipo de membrana. Ao final de 4 semanas os animais serão sacrificados e serão realizados os seguintes ensaios: (1) análise tomográfica (micro-CT) dos defeitos previamente criados; (2) análise histológica com base em cortes histológicos não-descalcificados; (3) PCR em tempo real para detecção de RNAm para os marcadores osteoblásticos fator de transcrição 2 com domínio Runt (RUNX2), fosfatase alcalina (ALP), sialoproteína óssea (BSP), osteocalcina (OC), osteopontina (OPN), osterix (OSX) e osteoprotegerina (OPG); e para os marcadores osteoclásticos ligante do receptor para a ativação do fator nuclear kappa B (RANKL), receptor para a ativação do fator nuclear kappa B (RANK), catepsina K, metaloproteinase-9 da matriz (MMP-9) e receptor para a calcitonina. Estes marcadores ósseos serão também detectados em amostras de tecido ósseo retiradas da calvária no momento da cirurgia para a colocação das membranas com o objetivo de comparar o osso neoformado sobre as membranas com o tecido ósseo previamente existente. O número de amostras para cada grupo será 5 (n=5). Os testes estatísticos para analisar os resultados numéricos serão selecionados de acordo com a distribuição das amostras.

A terapia celular, utilizando células-tronco mesenquimais (CTMs), tem sido proposta como tratamento potencial para o reparo de defeitos ósseos, constituindo uma abordagem de interesse para as áreas de cirurgia buco-maxilo-facial e ortopedia, principalmente em situações de não-união de fraturas. Além da utilização de CTMs bem caracterizadas, a seleção do mecanismo utilizado para acondicioná-las nos sítios de defeitos ósseos é fator chave para o sucesso do tratamento. Nesse cenário, os biomateriais, entre os quais os vidros bioativos (e.g.: Biosilicato®) e os compósitos de polímero/cerâmica (e.g.: P(VDF-TrFE)/BT), representam uma alternativa viável para serem empregados como carreadores de células em terapia celular. Como a osteoporose aumenta dramaticamente o risco de ocorrência de fraturas ósseas, estratégias envolvendo terapia celular deveriam focar, além do tratamento de defeitos de ossos normais, também ossos osteoporóticos nos quais o processo de reparo é sabidamente deficiente. Assim, os objetivos desse estudo são: (1) caracterizar in vitro as CTMs derivadas de medula óssea e de tecido adiposo de ratos normais durante os processos de diferenciação osteoblástica e adipocítica quanto à expressão de marcadores de superfície de CTMs, proliferação e viabilidade celulares, formação de matriz extracelular mineralizada, formação de acúmulo lipídico e expressão gênica (análise de microarray) e proteica (análise proteômica), em larga escala e temporal, em culturas crescidas em condições osteogênicas e adipogênicas; (2) avaliar in vivo o efeito da terapia celular com CTMs, derivadas de medula óssea e de tecido adiposo, associadas aos carreadores Biosilicato® e P(VDF-TrFE)/BT, no reparo de defeitos de ossos normais e osteoporóticos, utilizando o modelo de defeito ósseo criado em calvária de ratas, por meio de análises tomográfica, histológica e histomorfométrica. Nossos resultados, em conjunto, representarão um avanço em termos de pesquisa translacional em terapia celular e poderão influenciar diretamente a rotina de trabalho nas clínicas odontológica e médica, em especial aquelas ligadas ao Sistema Único de Saúde, por estabelecer novos tratamentos para o reparo de não-união de fraturas que poderão beneficiar tanto pacientes normais quanto pacientes osteoporóticos.

Atualmente, as células mesenquimais de diversas origens são consideradas fontes para substituição de tecidos. Estas células têm potencial osteogênico e podem ser elegíveis para o reparo e manutenção do tecido ósseo, sendo muito atrativas para a engenharia tecidual. Entretanto, mudanças no seu comportamento podem ser causadas por fatores como a osteoporose, afetando a sua habilidade de auto-renovação e diferenciação. Nossa hipótese é que na realidade a base dessas mudanças está na alteração da expressão gênica de células osteoblásticas Sendo assim, o objetivo do presente projeto é comparar a expressão de RNAs mensageiros (RNAm) e de microRNAs (miRNAs) de células mesenquimais provenientes da medula óssea diferenciadas em células osteoblásticas com o de células osteoblásticas provenientes da calvária de ratas submetidas à condição de osteoporose. Serão utilizadas 18 ratas Wistar divididas em grupos controle e tratado (indução da osteoporose). As ratas do grupo tratado serão submetidas à ovariectomia bilateral através de protocolo adequado e após 150 dias da cirurgia, as ratas de ambos os grupos serão sacrificadas para coleta dos fêmures e de fragmentos da calvária. Os experimentos serão realizados em triplicata e a partir dos materiais coletados, serão isoladas as células mesenquimais da medula óssea e as células osteoblásticas da calvária e colocadas em garrafas com meio de cultura suplementado (osteogênico) para proliferação e posterior plaqueamento em placas de 24 poços (n=5) para avaliação dos seguintes parâmetros: proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total e atividade de fosfatase alcalina (ALP), detecção e quantificação de nódulos mineralizados e análise da expressão de proteínas associadas à osteogênese por meio de imunofluorescência e PCR em tempo real. Além disso, será realizada a avaliação do perfil transcricional (RNAm e miRNAs) e reconstrução de redes de interação entre estes.. Os dados dos ensaios bioquímicos serão analisados com o auxílio de programas de estatística para p&#8804;0.05 assim como programas de bioinformática especializados serão utilizados para avaliar os dados do perfil transcricional e reconstrução de redes de interação.

Implantes de titânio têm sido extensivamente utilizados na Ortopedia e na Odontologia, principalmente como substituto de elementos dentários ausentes. O titânio é um implante metálico de escolha devido a sua alta biocompatibilidade e resistência à corrosão, e também porque não provoca reações imunológicas ao mesmo tempo em que promove a osseointegração. A biocompatibilidade do implante depende da resposta celular em contato com a sua superfície; sendo assim, mudanças nesta superfície podem provocar impactos benéficos na osseointegração através de alterações nas interações com as células presentes no local do implante, como por exemplo, células osteoblásticas. O objetivo do presente projeto é caracterizar o comportamento de células osteoblásticas humanas provenientes da crista óssea alveolar em contato com titânio controle (polido) e diferentes superfícies de titânio obtidas sendo denominadas nanotopografia, micro + nanotopografia e microtopografia rugosa.&#10;Os ensaios bioquímicos a serem realizados serão proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total e atividade de fosfatase alcalina, além da detecção e quantificação de nódulos mineralizados, com a utilização de teste estatístico apropriado para p&#8804;0,05. Também será realizada a identificação de genes induzidos e reprimidos nas células em contato com as diferentes superfícies de titânio por meio do método de oligoarray utilizando lâminas Agilent formato 4 x 44 K e análise de miRNAs. Os dados serão analisados com o auxílio de programas de bioinformática especializados como SAM (significance analysis of microarrays), Cluster-TreeView e GeneNetwork e a plataforma de bioinformática GeneSpring (Agilent). A partir destes dados de níveis de transcrição reconstruiremos redes de interação gênica para finalmente avaliarmos em conjunto o papel de cada um em resposta ao contato com a superfície de titânio.

Em um dente totalmente formado, estímulos irritantes como lesões cariosas, injúrias químicas ou mecânicas podem atuar sobre os odontoblastos levando-os a uma modulação de suas atividades para a formação de dentina. A dentina formada nestas circunstâncias pode aumentar a distância entre o estímulo irritante e as células pulpares, podendo também modificar a sua permeabilidade, promovendo uma barreira de proteção para o complexo dentino-pulpar.&#10;Atualmente, a utilização do laser tem sido considerada um dos maiores avanços tecnológicos para a Medicina e Odontologia. Devido a suas propriedades diferenciais como monocromaticidade, coerência, direcionalidade e brilhância, o laser pode depositar uma grande quantidade de energia nos tecidos biológicos com extrema precisão, o que permite a sua utilização em diagnósticos e terapias nas mais diversas áreas. A terapia com laser de baixa intensidade promove uma biomodulação celular na cicatrização de feridas, na proliferação de fibroblastos, na síntese de colágeno e na regeneração de tecidos ósseo e nervoso, sendo ainda uma estratégia de tratamento a ser utilizada na terapia pulpar, pela bioestimulação das respostas reparadoras naturais das células pulpares, especialmente dos odontoblastos.&#10;O objetivo deste estudo é avaliar in vitro o efeito da irradiação do laser de baixa intensidade no comportamento de uma linhagem odontoblástica (MDPC-23) de camundongos. Serão efetuados experimentos para avaliação da proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total, atividade de fosfatase alcalina e formação de nódulos de mineralização, além de detecção fatores de crescimento e de proteínas essenciais para a função dos odontoblastos através de microscopia de imunofluorescência indireta, ELISA e PCRRealTime.

O objetivo principal deste estudo é avaliar o comportamento de células de uma linhagem odontoblástica (MDPC-23) em contato com a solução saturada de biosilicato. Os parâmetros a serem avaliados serão: proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total, atividade de fosfatase alcalina e expressão de proteínas visualizadas através de imunofluorescência.

Este projeto de pesquisa tem como principal objetivo o processamento e avaliação in vivo e in vitro do poli(ácido láctico) e copolímeros sintetizado pelo grupo, bem como comercial. Atualmente possuímos infra-estrutura e experiência na área de síntese de PLA e copolímeros, e uma intensa colaboração com empresas (A.S Technology) e com profissionais da acadêmia (PUCRS, USP) que testam nossos polímeros in vitro. Neste projeto estamos propondo o projeto e a confecção de peças com possibilidade de serem utilizadas em testes in vivo (ratos). Temos interação com a medicina, inclusive com uma doutoranda (química e mestre em engenharia de materiais) da medicina (estagiária da A.S Technology) trabalhando na síntese de PLA e copolímeros para a recuperação de nervos, bem como para implantes. Além disso, temos um biólogo, mestrando em Engenharia e Tecnologia de materiais que trabalha na adaptação de testes in vitro para os materiais sintetizados pelo grupo.O projeto de síntese de PLA vem sendo financiado pela empresa A.S Technology, que terá a prioridade de uso do(s) material(is) desenvolvido(s).

Este projeto de pesquisa tem como principal objetivo a síntese e caracterização de sistemas poliuretanos obtidos a partir de políois como o PLA e a avaliação da degradação e citotoxicidade in vitro deste biomaterial. Atualmente possuímos infra-estrutura e experiência na área de síntese de outros biomaterias, no caso os PLA e copolímeros, e uma intensa colaboração com empresas (A.S Technology) e com profissionais da academia (PUCRS, USP) que testam nossos polímeros in vitro. Este projeto propõe o estudo de métodos de síntese de biomaterias poliuretanos (PU) e sua caracterização completa (propriedades químicas e mecânicas), bem como a avaliação da degradação e citotoxicidade dos mesmos em testes in vitro. Temos interação com a Medicina-PUCRS, inclusive com uma doutoranda da medicina (química e mestre em engenharia de materiais) e estagiária da A.S Technology trabalhando na síntese de PLA e copolímeros. Além disso, iniciamos recentemente uma cooperação científica com grupo do Professor Dr. José Miguel Martín Martinez, Laboratório de Adesivos e Adesão da Universidade de Alicante, Espanha. O Professor Martín-Martínez e seu grupo têm grande experiência e reconhecimento internacional no estudo de sistemas poliuretanos, principalmente caracterização de materiais poliuretanos.