Daniela Pretti da Cunha Tirapelli.

Introdução: Glioblastomas (GBM) são os tumores cerebrais primários malignos mais comuns, e apresentam elevada taxa de mortalidade. Apesar dos atuais avanços na terapia, os GBMs são extremamente resistentes à radiação ionizante e aos quimioterápicos, e o número de recidivas é elevado. Estudos trazem que esse eminente potencial tumorigênico deve-se à presença de uma subpopulação de células neoplásicas, com características de células tronco, denominadas células tronco tumorais (CSCs). Em gliomas, o isolamento dessas células tronco tumorais tem sido feito através de marcadores antigênicos e observando as condições de cultura de células tronco neurais normais in vitro. Isto é, a proliferação de células tumorais flutuantes quando colocadas em cultura, são análogas às neurosferas derivadas das células tronco neurais normais, em condições de cultura definidas. Acredita-se que as CSCs sejam as responsáveis pelo restabelecimento do tumor e pela baixa eficácia do tratamento, visto que essas células demonstram propriedades malignas como tumorigênese, radiorresistência e quimiorresistência. A implicação prática desse achado é que nenhuma terapia atual é capaz de suprimir ou parar a proliferação dessas células. Diversos microRNAs têm sido relacionados ao desenvolvimento e proliferação dos glioblastomas, associados a diversos mecanismos moleculares. Estudos demonstram que nos tumores cerebrais esses microRNAs apresentam níveis de expressão alterados, sendo um dos mecanismos essenciais para regulação das células tronco tumorais (CSCs). Objetivos: Analisar o perfil de expressão global de microRNAs em neuroesferas e células aderidas de culturas primárias de pacientes com diagnóstico de glioblastoma submetidas aos tratamentos com radiação ionizante e da temozolomida, associadas ou isoladas. Material e Métodos: Serão utilizadas culturas primárias de 10 pacientes com diagnóstico de glioblastoma. A análise global de expressão será realizada pela técnica de TaqMan® Low Density Array microRNA (TLDA) para quantificação da expressão dos microRNAs nos dois grupos (neuroesferas e células adquiridas) em cada um dos subgrupos de tratamento: controle, radiação ionizante, temozolomida e temozolomida associada a radiação ionizante.

Este projeto trata-se de uma cooperação estrangeira entre a Divisão de Neurocirurgia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da USP e o professor PhD MD Ossama Al-Mefty (Harvard University). Os meningiomas são tumores intracranianos que se originam das células meningoteliais da aracnóide, com incidência anual de aproximadamente seis a cada 100.000 pessoas, sendo mais comum em adultos, mulheres e após a quinta década de vida. Pouco se sabe sobre os eventos genéticos que são importantes na patogenia molecular e sobre a progressão da malignidade dos meningiomas. O evento genético mais comum e encontrado em aproximadamente 60% dos casos é a deleção no cromossomo 22q. O entendimento da iniciação e do crescimento dos meningiomas a nível molecular , pode ajudar a definir alvos de terapia molecular. A formação de tumores cerebrais é um processo complexo que envolve um acúmulo de alterações genéticas. Os MicroRNAs (miRNAs ou miRs) são uma classe de pequenos RNAs não codificadores que regulam expressão gênica, com um papel crucial no desenvolvimento do câncer e recentemente, o envolvimento dos miRNAs na fisiopatologia do câncer cerebral vem se destacando. Considerando-se que a deleção no cromossomo 22 é a alteração mais freqüente neste tipo de tumor, as vias moleculares que resultam no comportamento cromossômico anormal durante a progressão dos meningiomas estão relacionados a uma série de complexas interações que ainda precisam ser bem caracterizados, uma delas é a possível relação entre esta alteração cromossômica e a expressão gênica. Objetivos: Avaliar perfis diferenciais de expressão gênica entre os meningiomas que apresentam deleção do cromossomo 22 e compará-los os meningiomas que não apresentam desta deleção. Pacientes e Métodos: Para este estudo serão utilizadas 90 amostras de meningiomas grau I. Os casos serão selecionados com base em diagnósticos clínicos e histopatológico de meningiomas grau I, segundo critérios da OMS. Como controles serão utilizadas amostras

Diversos estudos têm demonstrado que vários tipos de câncer apresentam características semelhantes ao de células-tronco embrionárias. Relatos de grupos de diferentes países têm mostrado que assinaturas de expressão gênica embrionária parecem estar reativadas em diversos tipos de câncer. Entre os genes expressos reativados podemos encontram-se fatores que determinam o fenótipo de pluripotência como OCT-4, NANOG, STE OCT4, NANOG, EZH2, STELLA, SUZ12, CARM1, GDF3 e BMI1. Tais fatores têm se mostrado essenciais na manutenção do estado de indiferenciação de células tronco e são controlados por fatores epigenéticos como a metilação do DNA. Perda de função desses genes causa diferenciação celular. A expressão desses fatores de pluripotência em câncer pode representar futuros alvos terapêuticos em tumores com auto grau de indiferenciação. O presente estudo visa estudar a expressão de um conjunto de genes envolvidos no fenótipo de pluripotência de células-tronco em tumores do sistema nervoso central. Serão investigados também os padrões de metilação do DNA dos genes OCT4 e NANOG, os quais são os genes principais no estabelecimento da pluripotência. As técnicas a serem abordadas nesse estudo serão: a quantificação da expressão gênica por PCR em tempo real; análise da metilação do DNA por modificação por bissulfito de sódio.

Projeto é uma parceria entre o Department of Neurosurgery of College of Medicine of University of Arkansas, Little Rock, U.S.A., representada pelo MD. PhD. Ossama Al-Mefty e MD. Svetlana Pravdenkova e a Disciplina de Neurocirurgia do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo representada pelo Prof. Dr. Carlos Gilberto Carlotti Jr., Prof. Dr. Benedicto Oscar Colli e Profa. Dra. Daniela Pretti da Cunha Tirapelli. O referido projeto será tema de pós-doutorado da Profa. Dra. Daniela Pretti da Cunha Tirapelli sob a supervisão do Prof. Dr. Carlos Gilberto Carlotti Jr.

À partir de um modelo experimental em ratos submetidos à isquemia cerebral focal transitória por oclusão da ACM, os seguintes objetivos são propostos: 1) Avaliar o possível efeito neuroprotetor da hipotermia e/ou cetoprofeno no processo isquêmico, através da análise da área isquêmica dos animais tratados com a hipotermia e/ou cetoprofeno em comparação aos animais do subgupo I; 2) Estudar o padrão da expressão dos genes relacionados à vida apoptótica extrínseca (receptores NMDA e FAS, da proteína inibidora c-FLIP, além das caspase-8 e caspase-3 e da proteína HSP70), pelas técnicas de RT-PCR semiquantitativa e RQ-PCR quantitativa em tempo real, no processo isquêmico isolado ou associado à hipotermia e/ou cetoprofeno.

Projeto realizado em uma parceria da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo com a University of Arkansas at Litlle Rock.

O objetivo deste projeto é estudar, em meningiomas humanos, por meio das técnicas de PCR em tempo real e imunohistoquimica, a susceptibilidade das células tumorais ao estímulo apoptótico, processo influenciado por centenas de genes que controlam sua iniciação, execução e regulação.

Nesse projeto será quantificada a expressão gênica do apoptossoma (citocromo c, APAF-1 e caspase 9) em glioblastomas humanos através da técnica de PCR em tempo real. 	Para o estudo serão utilizadas 30 amostras de tecido nervoso tumoral humano (glioblastomas), obtidas de cirurgias realizadas no - HC-FMRP-USP, a partir do grupo de pesquisa coordenado pelo Prof. Dr. Carlos Gilberto Carlotti Júnior, pertencente ao projeto temático Genoma Clínico. Os casos foram selecionados após o diagnóstico clínico e histopatológico de glioma difuso (grau IV), conforme critérios descritos pela OMS. Como controle serão utilizadas amostras do lobo temporal de pacientes epilépticos sem diagnóstico de tumor.

O projeto tem como objetivo estudar a expressão gênica de Smac/Diablo (pró-apoptótica) e XIAP (anti-apoptótica) em meningiomas através da técnica de PCR em tempo real. O estudo será realizado em 30 amostras de pacientes com diagnótico anatomo-patológico de meningioma nos seus três graus: I, II e III (com 10 pacientes em cada grupo).