Otávio Cabral Marques.

Esse projeto buscou levar a musica popular infantil como forma de apoio à crianças internadas no Hospital Universitário da Universidade de São Paulo

O projeto teve como objetivo ensinar inglês de uma forma dinâmica e criativa visando contribuir com o desenvolvimento socio-educacional de crianças em condições de vulnerabilidade social atendidas pela associação de Apoio à Infância e Adolescência Nossa Turma, estabelecida dentro do Entreposto Terminal São Paulo (ETSP)

O projeto foi desenvolvido objetivanto que alunos sem acesso a curso pré-vestibular (isto é, em condições de vulnerabilidade social) possam se preparar adequadamente para o vestibular realizado por universidades Publicas do estado de São Paulo

O objetivo desse projeto é caracterizar o estado de exaustão celular, vias de sinalização e assinaturas imunológicas comuns e específicas dos linfócitos T de pacientes infectados com ZIKV e DENV. Além disso, objetivamos identificar as redes de co-expressão de proteínas e genes essenciais à resposta imune contra esses dois vírus através de uma abordagem sistêmica e integrativa.

A atual pandemia da nova doença respiratória Coronavírus 2019 (COVID-19) configura um estado de emergência pública internacional. O vírus causador da doença é denominado síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 (SARS-CoV-2) e tem circulado por todo o mundo, desencadeando manifestações clínicas que variam de casos assintomáticos à síndrome respiratória aguda grave e à morte, principalmente dos indivíduos portadores de comorbidades (ex: hipertensão, diabetes e asma). Sugere-se, desse modo, a influência de fatores imunológicos e de outros fatores intrínsecos do hospedeiro no controle do desenvolvimento da doença. Enquanto isso, pacientes que desenvolvem o quadro grave da doença podem ir a óbito devido à intensa imunodesregulação. Contudo, o conhecimento a respeito dos mecanismos imunológicos sistêmicos que controlam a proteção contra o SARS-CoV-2 ainda é escasso e a resposta sistêmica dos linfócitos T CD4+, leucócitos efetores e reguladores do sistema imune, ainda permanece por ser caracterizada. A hipótese desse projeto é que os linfócitos T dos pacientes com COVID-19 tenham um perfil sistêmico de exaustão (definida por baixa função efetora associada a expressão elevada de receptores inibitórios). Em outras palavras, os linfócitos T dos pacientes que desenvolvem um fenótipo mais grave da doença possuem um aumento na rede de interação de genes/proteínas associado ao mecanismo de exaustão, influenciando a gravidade do fenótipo da doença. Assim, este projeto objetiva caracterizar os mecanismos da exaustão da resposta imune dos linfócitos T de pacientes infectados por SARS-Cov-2, com COVID-19 leve e grave. Realizaremos uma abordagem sistêmica e integrativa, investigando o transcriptoma dos linfócitos T CD4+ seguido por ensaios funcionais específicos de validação da triagem de alto rendimento (análise do transcriptoma). Além disso, realizaremos uma metanálise de dados previamente depositados no ArrayExpress e GEO (do inglês, Gene Expression Omnibus) para determinar as redes de co-expressão gênica que regulam sistemicamente a resposta imune ao SARS-CoV-2. Essa abordagem experimental em larga nos permitirá definir as assinaturas imunológicas, vias de sinalização e redes de co-expressão gênica e das interações moleculares (interactoma) e metabólicas (metaboloma) envolvidos na resposta imune contra SARS-CoV-2. Deste modo, promoverá um estudo translacional e multidisciplinar que poderá identificar biomarcadores para o diagnóstico diferencial. Esse fato abrirá caminhos para o desenvolvimento de novas terapias específicas que reduzam a mortalidade e a morbidade induzida pelo vírus.

Common variable immunodeficiency (CVID) is a heterogeneous antibody deficiency syndrome. Chronic gastrointestinal diseases occurs in 10-15% of patients and increase the morbidity and mortality observed in CVID patients.
We employed a stepwise, integrated systemic approach to investigate the blood and duodenal biopsies of 30 CVID patients with GI complaints. We define patterns of clinical, histological and immunological associations and determined local tissue signatures reflecting VA.

There is growing evidence that the nervous and the immune systems intercommunicate through soluble mediators such as neurotransmitters. Importantly, Immune cells such as neutrophils, express muscarinic acetylcholine receptors (mAChR), which are neuroimmune receptors highly prevalent in the central and parasympathetic nervous system. Aberrant neutrophil functioning plays an important role in various autoimmune diseases and dysregulation of neutrophil immune responses such as oxidative burst and migration is one of the key mechanisms leading to tissue damage during, for example, autoimmune manifestation. Furthermore, neurological symptoms like e.g. fatigue are common in patients with autoimmune diseases, pointing towards an involvement of pathological neuroimmune signalling. However, the impact of mAChR activation on neutrophils still remains contradictory.
We aimed to investigate the effect of muscarinic receptor activation on neutrophil development and function.

Imunodeficiências primárias (IDPs) representam uma oportunidade inestimável para compreendermos in natura os genes e mecanismos da resposta imune envolvidos na resposta imune antifúngicas em humanos. Pacientes com a IDP por deficiência de CD40 ligante (CD40L) são suscetíveis a infecções fúngicas invasivas, as quais apesar do tratamento por meio da reposição de imunoglobulinas continuam acometendo esses indivíduos e resultando em morbidade severa e altos índices de mortalidade. Neutrófilos e macrófagos são as células efetoras do sistema imune responsáveis pela atividade fungicida, porém, desde a descoberta da deficiência de CD40L no ano de 1993, a resposta imune mediada por esses fagócitos ainda não foi investigada nesses pacientes. Estudos com células de humanos controles saudáveis e modelos murinos demonstram que a interação CD40L-CD40 exerce importante função reguladora durante a ontogenia e ativação dos fagócitos. Essas células após o reconhecimento de padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs) pelos receptores de reconhecimento de padrões (PRRs) produzem citocinas, reativos intermediários de oxigênio, acidificam o fagolisossomo, e disparam outros mecanismos essenciais à resposta imune antifúngica. A eficiente ativação dos fagócitos mediada pelos PRRs ocorre por meio da ativação do fator de transcrição NF-κB, a qual depende, pelo menos parcialmente da interação CD40L- CD40. Na ausência desta, a ativação do NF-κB e função desses receptores pode ser comprometida. Acreditamos que falhas na função de neutrófilos e macrófagos em pacientes deficientes de CD40L contribuam para a susceptibilidade a infecções fúngicas. Objetivamos estudar a resposta imune antifúngica mediada por neutrófilos e macrófagos de pacientes deficientes de CD40L e testar in vitro a ação do IFN-γ e CD40L solúvel (CD40Ls) sobre esses fagócitos. Este projeto contribuirá para o avanço do conhecimento sobre a interação CD40L-CD40 na resposta imune antifúngica em humanos, assim como vislumbrar novas aplicações terapêuticas para o IFN-γ e/ou CD40Ls no tratamento de infecções fúngicas nesses pacientes.

Nós hipotetizamos que a expressão constitutiva de um ou mais componentes do sistema NAPDH oxidase e a função de todo o complexo NADPH oxidase é dependente do IFN-gama em macrófagos humanos e provavelmente em células dendríticas. Assim, erros inatos das respostas do IFN-gama em pacientes com Susceptibilidade Mendeliana a Micobacterioses (MSMD) com deficiência do IFNGR resultariam na expressão defeituosa de um ou mais componentes do sistema NADPH oxidase em macrófagos, resultando na diminuição da atividade do "burst" oxidativo nestas células e susceptibilidade ao BCG e ao M. tuberculosis nestes pacientes com MSMD. A atividade normal do "burst" oxidativo em granulócitos e monócitos dos pacientes com MSMD devido à deficiência no IFNGR protegeria-os contra outras bactérias e fungos, explicando a não ocorrência das infecções típicas observadas em pacientes com CGD. Portanto, o objetivo principal do presente projeto é o de identificar os principais genes alvos anti-micobacterianos na via de ativação do IFNGR, incluindo um ou mais genes codificadores de componentes da NADPH oxidase, pelo menos para a imunidade contra BCG e M. tuberculosis. Para testar esta hipótese nós avaliaremos células primárias de pacientes com MSMD (tais como granulócitos, monócitos e macrófagos), células EBV B, macrófagos derivados de monócitos (MDMs), e células dendríticas.

O estudo mais amplo sobre mecanismos moleculares, novas alternativas farmacológicas para o tratamento e controle das infecções devem ser considerados na investigação de imunodeficiências primárias como a Doença Granulomatosa Crônica (DGC). Sabemos que nesse contexto, os pacientes com DGC melhoram seu quadro clínico após tratamento com IFN-γ. Contudo, o mecanismo de ação inicialmente atribuído à regulação positiva da NADPH oxidase e iNOS não se confirmou. Portanto, a maquinaria de transdução de sinais e mecanismos moleculares envolvidos permanecem obscuros. Estudos recentes mostram que o cGMP aparece como uma molécula mensageira chave em inúmeros processos celulares envolvidos na resposta imunológica, como na diferenciação, quimiotaxia, proliferação e liberação de mediadores imunológicos (Kobialka & Gorczyca, 2001). Além disso, suas vias de transdução de sinais culminam na ativação de fatores de transcrição importantes para a expressão gênica de componentes do sistema NADPH oxidase (Samten et al., 2005). Com base nessas observações, investigaremos se cGMP modula este processo, usando o fármaco BAY 41-2272 (5-cyclopropyl-2-[1 -(2-fluoro-benzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine-3-yl]pyrimidin-4ylamine), ativador da enzima guanilato ciclase solúvel (GCs), com conseqüente elevação dos níveis de cGMP (Stasch et al, 2001; Stasch et al, 2002). Propomos investigar os efeitos do BAY 41-2272 sobre a linhagem pró-monocítica THP-1 e monócitos do sangue periférico de voluntários sadios, estendendo para pacientes com DGC. Para isso, propomos a realização de tratamentos farmacológicos dos leucócitos in vitro com BAY 41-2272 e posterior análise das proteínas sinalizadoras e fatores de transcrição envolvidos com o desenvolvimento, diferenciação e ativação celular.

A Tuberculose é uma doença infecciosa causada por micobactérias do complexo tuberculosis. O principal patógeno é Mycobacterium tuberculosis. Aproximadamente 8 milhões de novos casos e 2 milhões de mortes são registrados a cada ano. Por meio do estudo da susceptibilidade mendeliana a doenças causadas por micobactérias (MSMD), foram identificadas mutações em 6 genes relacionados ao funcionamento do eixo interleucina 12 (IL-12) e interferon-gama (IFN-g), sendo que algumas levam a defeitos no "burst" oxidativo semelhante aos encontrados em pacientes com doença granulomatosa crônica (DGC), doença onde fagócitos apresentam atividade microbicida defeituosa, resultado da baixa produção de superóxido, devido a mutações que afetam um dos genes do sistema NADPH oxidase. Podemos dividir as IDPs relacionadas com defeitos no "burst" oxidativo em dois grupos: àqueles com defeitos primários - alterações genéticas situadas em um dos genes do sistema NADPH oxidase (CYBB, CYBA, NCF1, NCF2, NCF4, entre outros); e àqueles com defeitos secundários - alterações genéticas em outros genes que afetam indiretamente a atividade NADPH oxidase, como NEMO, IRAK4, CD40L, IFNGR1 e IFNGR2 completo. Essas observações nos fazem acreditar que estamos diante de uma manifestação bioquímica celular comum, onde essa rede de interações moleculares envolvendo diversos genes, responde pela manutenção fisiológica da produção dos reativos intermediários do oxigênio, que vem sendo cada vez mais estudada pelo nosso grupo. O objetivo deste trabalho é identificar novas mutações em genes conhecidos ou novos genes envolvidos na MSMD de pacientes com diferentes formas de tuberculose, valendo-se de tecnologias avançadas de investigação genética. As descobertas pretendem contribuir para o avanço do conhecimento sobre a fisiopatologia da MSMD e o aperfeiçoamento do diagnóstico, tratamento e aconselhamento genético dos indivíduos afetados, assim como na concepção de novas políticas públicas voltadas para a prevenção e o manejo da tuberculose nas diversas populações, um importante tópico de saúde pública.

A síndrome de Hiper IgM (HIGM) é uma imunodeficiência primaria pouco freqüente, caracterizada por infecções recorrentes e níveis plasmáticos normais ou elevados de IgM e níveis diminuídos ou ausentes de IgG, IgA e IgE . É caracterizada também por defeito no processo de recombinação somática (CSR), hipermutação somática (SHM) e na formação do centro germinativo (GC), eventos cruciais na troca de isótipo de cadeia pesada de imunoglobulinas. Clinicamente HIGM caracteriza-se pela susceptibilidade dos pacientes a infecções bacterianas recorrentes do trato respiratório e infecções por patógenos oportunistas. Sete defeitos conhecidos podem causar a síndrome de HIGM. A HIGM1 é uma desordem causada por mutações no gene que codifica a molécula ligante CD40 (CD40L, CD154 ou TNFSF5) expresso na superfície de células T ativadas, sendo a forma ligada ao cromossomo X. Dentre as formas autossômicas, a HIGM2 é causada por mutações no gene da Activation-lnduced Cytidine Deaminase, (AICDA, AID ou CDA2), sendo esta a forma autossômica mais freqüente. A HIGM3 é causada por mutações no gene CD40 (TNFRSF5), sendo imunológica e clinicamente indistinguível da HIGM 1. A HIGM4 está associada a defeitos na CSR, sem danos a SHM. A HIGM 5 origina-se de defeitos na Uracil DNA Glicosilase (UNG). Existem ainda defeitos no modulador essencial NF-κB, e no NFKBIA, que codifica IκBα, que podem levar a HIGM. Uma vez que estes defeitos genético-moleculares resultam em características clínicas similares, o estudo molecular e genético é importante para a realização do diagnóstico diferencial, estratégia terapêutica e prognostica dos casos. O objetivo deste trabalho é investigar os defeitos genético-moleculares de pacientes com HIGM autossômica, analisando suas particularidades genotípicas e fenotípicas, em um grupo de pacientes brasileiros com diagnóstico clínico de HIGM.

A síndrome de Hiper IgM (HIGM) caracteriza-se por níveis normais ou elevados de IgM associados com deficiência de IgG e IgA, defeito no processo de recombinação somática (CSR), hipermutação somática (SHM) e na formação do centro germinativo (GC), eventos cruciais para a troca de isótipo de cadeia pesada de imunoglobulinas. Clinicamente HIGM caracteriza-se pela susceptibilidade dos pacientes a infecções bacterianas recorrentes do trato respiratório como, otite média, pneumonia, septicemia e infecções por patógenos oportunistas como o Pneumocystis carinii, Citopenias, Neoplasias e enfermidades hepáticas são responsáveis pela alta mortalidade destes pacientes. Aqueles que sobrevivem depois dos 20 anos de idade, freqüentemente desenvolvem colangite esclerosante, hepatopatia crônica ou neoplasia hepática. Sete defeitos conhecidos podem causar a síndrome de HIGM. A HIGM1 é uma desordem causada por mutações no gene que codifica a molécula ligante CD40 (CD40L, CD154 ou TNFSF5) expresso na superfície de células T ativadas. A HIGM2 é causada por mutações no gene da Activation-Induced Cytidine Deaminase, (AICDA, AID ou CDA2). A HIGM3 é causada por mutações no gene CD40 (TNFRSF5), sendo imunológica e clinicamente indistinguível da HIGM 1. A HIGM4, associada a defeitos na CSR sem danos a SHM, e a HIGM 5 originada por defeitos na Uracil DNA Glicosilase (UNG); defeitos no modulador essencial NF-xB, e no NFKBIA, que codifica hcBa. Uma vez que estes defeitos genético-moleculares resultam em características clínicas similares, o estudo molecular e genético é importante para a realização do diagnóstico diferencial, estratégia terapêutica e prognóstico dos casos. Por sua vez, o avanço do conhecimento sobre a fisiopatologia deste grupo de doenças permitiu redefinir a classificação e o entendimento de novos mecanismos imunopatológicos em humanos, além de identificar um novo grupo de patógenos causadores de morbidade em tais pacientes, como por exemplo, micobactérias. O Brasil apresenta peculiaridades ambientais inerentes a países em desenvolvimento, ampla miscigenação racial e um calendário vacinal que inclui patógenos vivos atenuados. Dessa forma, o objetivo deste trabalho consiste na análise do espectro clínico e os defeitos genético-moleculares associados num grupo de pacientes brasileiros com HIGM.

A deficiência de CD40 Ligante (CD40L) ou síndrome de Hiper-IgM ligada ao X (X-HIGM) é considerada uma imunodeficiência primária combinada de células T e B. O CD40L é expresso na superfície de linfócitos T ativados e interage com o CD40 expresso na superfície de linfócitos B, macrófagos, células dendríticas, células endoteliais e neutrófilos. A interação CD40L-CD40 transmite sinais que induzem ativação, diferenciação e proliferação celular. Nosso objetivo foi analisar as alterações genético-moleculares da molécula CD40L que acometeram indivíduos de 5 famílias brasileiras, ocasionando X-HIGM. Genotipamos 25 indivíduos, sendo 6 pacientes com X-HIGM, 13 parentes relacionados heterozigotos e 6 homozigotos sadios. Dentre os pacientes com X-HIGM dois eram de origem caucasóide e 4 eram mestiços. A idade dos pacientes variou de 2 a 20 anos e o quadro clínico de infecções de repetição teve início em média nos primeiros 4 meses de vida. As principais infecções recorrentes manifestadas pelos pacientes foram pneumonia e otite. O paciente TB apresentou blastomicose, observação original nesta imunodeficiência. A análise genético-molecular foi heterogênea. No paciente TB foi detectado um defeito de splicing levando a deleção do exon 3 (r.345_402del do gene CD40L (CD40LG) no paciente FS uma nova substituição missense g.11856 G>C (c.476 G>C, pW140C), no paciente KC uma substituição nonsense g.11855 G>A (c.475G>A, p. W140X), e nos pacientes CH, FE e VIC uma deleção g. 3074_3077delTAGA, levando a alteração no processamento do RNA. A fenotipagem dos leucócitos demonstrou que a contagem de linfócitos T auxiliares (CD3+CD4+), linfócitos citotóxicos (CD3+CD8+), linfócitos B (CD19+CD40+) e linfócitos T ativados (CD3+CD69+) dos pacientes foram similares aos controles sadios. Contudo, foi observada uma redução significativa nos níveis de expressão de CD40L na superfície de linfócitos CD3+ e CD4+ dos pacientes. A análise dos linfócitos T por microscopia confocal revelou que as células dos homozigotos com expressão residual do CD40L em sua superfície também apresentam redução na densidade da expressão da molécula CD3, sugerindo a necessidade da integridade molecular do CD40L para a expressão normal do CD3. Concluímos que mutações no CD40L que levam à síndrome de X-HIGM são heterogêneas e a análise genético-molecular permitiu um diagnóstico preciso tornando possível o aconselhamento genético e a triagem dos recém-nascidos das famílias avaliadas.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica endêmica na América Latina causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis sendo clinicamente caracterizada por lesões granulomatosas, principalmente se manifestando nos pulmões a qual pode posteriormente se disseminar para outros órgãos, como mucosa, pele e linfonodos. Entretanto existem indivíduos infectados com P. brasiliensis que nunca desenvolvem a doença e os mecanismos subjacentes responsáveis pela susceptibilidade ou resistência a PCM permanecem por ser esclarecidos. A causa monogênica de mais de 100 imunodeficiências primárias (PID) são conhecidas gerando um melhor entendimento a respeito dos mecanismos imunológicos relativos a susceptibilidade a diferentes fungos. Geralmente os pacientes com PID são suscetíveis a uma variedade de patógenos, incluindo fungos, contudo defeitos congênitos do sistema imune resultando na Suscetibilidade Mendeliana a Doenças Micobacterianas, candidíase mucocutânea crônica, e outras, indicam que os defeitos congênitos da imunidade também pode resultar em susceptibilidade restrita a patógenos específicos. Embora PCM não tem sido comumente associado a PID, os dois primeiros pacientes com PCM e PIDs relatados na literatura são Brasileiros: um , com deficiência no subunidade beta-1 do receptor da IL-12/IL-23 e outro com a deficiência de CD40L. Falhas na resposta imune de fagócitos e células dendríticas foram encontrados, no último, em um projeto em andamento em nosso laboratório (FAPESP, 2006/52483-1, 2008/58800-4). Isto levou-nos a investigar defeitos da imunidade inata em pacientes com PCM. Possivelmente nosso objetivo de desenvolver o conhecimento sobre os mecanismos de defesa contra o P. brasiliensis possa revelar mutações em genes associados com PIDs previamente descritas ou descobrir novos genes associados com a susceptibilidade PCM como conseqüência de uma suscetibilidade mendeliana a paracoccidioidomicose (MSPD).