Cristiane Masetto de Gaitani.

Transplantes de órgãos sólidos podem salvar a vida de muitos pacientes com doenças ou lesões irreversíveis de órgãos. A terapia imunossupressora com o inibidor de calcineurina tacrolimus é usada para prevenir e tratar a rejeição do órgãos. Devido ao risco de rejeição de órgãos, infecção e toxicidade, estratégias de dosagem de precisão visam reduzir a variabilidade na farmacocinética (PK) de tacrolimus. Apesar do importante papel da farmacogenômica, variantes genéticas não são preditivas das amplas variações de expressão para certas enzimas-chave, como CYP3A4, e grande variabilidade de expressão pode ocorrer dentro de cada genótipo, como CYP3A5. As vesículas extracelulares (VE) derivadas do plasma ganharam espaço como novos biomarcadores fenotípicos, também conhecidos como tecnologia de biópsia líquida. As EVs são liberadas no sangue com conteúdo representativo de seu tecido de origem. Portanto, avaliar a variabilidade na expressão do CYP3A4/5 hepático e intestinal em EVs é uma alternativa promissora para informar a medicina de precisão. Um estudo clínico prospectivo, longitudinal cruzado será realizado para avaliar a PK do tacrolimus nos dias 1-3, semanas 4-5 e 8-9 após o transplante de fígado. Uma vez que a inflamação diminui a expressão do CYP3A4, iremos investigar se a inflamação pós-cirúrgica afeta a PK do tacrolimus. Um outro estudo prospectivo cruzado será realizado para avaliar o efeito da gastrectomia vertical na disposição cinética do tacrolimus uma vez que a obesidade é um fator de risco para esteato-hepatite não alcoólica e doença hepática gordurosa não alcoólica. Os níveis de citocinas pró-inflamatórias, dados de genotipagem, dados de expressão em EVs, bem como outras variáveis demográficas e clínicas, serão testados como covariáveis usando modelagem farmacocinética populacional (PopPK) e fisiológica (PBPK). Essencialmente, isso criará um gêmeo digital para cada paciente para desenvolver um pacote integrado de modelos altamente preditivos e estratégias de otimização de dosagem para tacrolimus.

Apesar da efetividade da poliquimioterapia (PQT) em reduzir os índices epidemiológicos da hanseníase, casos de recidiva e de falência terapêutica têm sido alvo de preocupação da OMS e do Ministério da Saúde do Brasil (MS). Em 2019, foram registrados no Brasil 1.698 casos de recidiva e 6.897 casos de retratamento, o que corresponde a 21,7 dos casos prevalentes. O Brasil é responsável por quase metade dos casos de retratamento no mundo. Entre os casos de recidiva e falência terapêutica testados no Instituto Lauro de Souza Lima (ILSL) dentro do programa de vigilância de resistência medicamentosa em hanseníase no período de 2015 a 2018, apenas 1,8 tiveram resistência molecular comprovada, suscitando a possibilidade de outros fatores estarem envolvidos no insucesso terapêutico. Cabe ressaltar que apenas três loci no genoma do patógeno são sistematicamente investigados, o que pode subestimar a magnitude dessa causa. Além disso, fatores genéticos do hospedeiro que podem influenciar a metabolização e disponibilidade das drogas não são alvo de investigação, embora já existam dados que revelam variabilidade interindividual de até dez vezes nos parâmetros farmacocinéticos da rifampicina, o que deve ter efeito sobre o sucesso da terapia contra a hanseníase. Alguns municípios brasileiros tem apresentado um montante elevado de casos de hanseníase refratários a PQT, mesmo após repetidos ciclos de tratamento, requerendo uma investigação mais detalhada desses eventos. A partir de uma solicitação do Ministério da Saúde, o ILSL propõe uma ampla investigação clínica e laboratorial desses casos e seus contatos para esclarecimento dos fatores envolvidos nesse cenário e delineamento de estratégias de intervenção.

O tratamento da epilepsia farmacorresistente é empírico, devido a ausência de diretrizes clínicas com evidências robustas para o manejo desta enfermidade. Por isso, recomenda-se a monitorização terapêutica (MT) de fármacos antiepilépticos (FAE). O sangue é a matriz biológica mais comum para o doseamento sérico de FAE, mas por ser um procedimento invasivo, diminui a adesão do paciente. Por isso, o estudo visa responder se a modelagem farmacocinética (PK)/farmacodinâmica (PD) e a MT de ácido valpróico, carbamazepina, fenitoína, fenobarbital, lamotrigina, levetiracetam e topiramato com o uso da saliva de indivíduos com epilepsia farmacorresistente contribui para a identificação, prevenção e resolução de problemas relacionados à farmacoterapia (PRF); bem como se há correlação das concentrações destes FAE na saliva e no sangue. Para tanto, será conduzido um ensaio clínico não randomizado de braço único por 34 meses no Ambulatório de Epilepsia de Difícil Controle (AEDC) do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto-USP. O estudo será realizado em três etapas. A primeira compreenderá o desenvolvimento e a validação dos métodos analíticos e a coleta de material biológico (sangue e saliva) de todos os participantes que contemplarem os critérios de inclusão, para quantificar e correlacionar as concentrações de FAE nestas matrizes. Nesta fase, os participantes receberão apenas o cuidado usual do AEDC. A segunda etapa é a intervenção, que é a implantação do cuidado farmacêutico. Cada participante será acompanhado por 12 meses, em cinco consultas farmacêuticas. Serão utilizados os resultados obtidos da MT para identificar, prevenir e solucionar os PRF reais e/ou potenciais. A terceira etapa é a pós-cuidado. Os participantes terão os desfechos de segurança, efetividade e adesão reanalisados por meio de aplicação de questionários, por um período de três meses. Os resultados das três etapas serão comparados para avaliar o impacto do cuidado farmacêutico na individualização da farmacoterapia, efetividade, segurança e adesão ao tratamento, com o auxílio da modelagem e simulação PK/PD populacional dos FAE na saliva como ferramentas para a coleta de dados objetivos durante a anamnese farmacêutica.

A obesidade é uma epidemia de proporções globais, geralmente associada a redução da qualidade de vida e a comorbidades como diabetes, hipertensão e dislipidemias. A cirurgia bariátrica do tipo derivação gastrojejunal em Y de Roux (Roux-en-Y gastric bypass RYGB), considerada o padrão ouro, é mais efetiva na perda de peso sustentada e na redução de comorbidades. No entanto, as alterações anatômicas realizadas durante a RYGB provocam mudanças no pH gástrico e intestinal, na superfície de absorção disponível, na abundância de enzimas e transportadores de fármacos e podem alterar a farmacocinética. Modelos farmacocinéticos baseados em Fisiologia (PBPK) foram desenvolvidos para prever o efeito da cirurgia bariátrica na farmacocinética. No entanto, a capacidade preditiva desses modelos PBPK para prever a disposição de fármacos é limitada pelos escassos dados clínicos para essa população e poucas informações sobre a abundância e regulação de enzimas metabolizadoras de fármacos e transportadores intestinais após RYGB. Assim, dois ensaios clínicos foram conduzidos para investigar a disposição cinética da sinvastatina (Estudo A) e carvedilol (Estudo B) em voluntários saudáveis, pacientes com obesidade mórbida e em pacientes após o bypass gástrico em Y de Roux.

A microextração líquido-líquido dispersiva (DLLME, dispersive liquid-liquid microextraction), é uma microtécnica de preparo de amostra que consiste no equilíbrio de distribuição do analito entre as fases aquosa (doadora) e orgânica (aceptora) e é ideal para a extração de compostos com propriedades lipofílicas moderadas a altas ou que possam ter seu coeficiente de distribuição (log D) alterado pelo controle do pH. Na DLLME é utilizada uma mistura de dois solventes orgânicos, um solvente com alta densidade e imiscível na fase aquosa (denominado solvente extrator) e outro solvente miscível na fase aquosa e no solvente extrator (denominado solvente dispersor). A extração acontece quando a mistura solvente extrator/dispersor é injetada de maneira rápida em um tubo contendo a fase aquosa (amostra). Instantaneamente é formada uma nuvem promovida pela dispersão do solvente extrator na fase aquosa. Após a formação do ponto nuvem é realizada a centrifugação, onde as microgotas do solvente extrator e analito são depositadas no fundo do tubo, formando a fase sedimentada, que é retirada e analisada. Entre os solventes dispersores normalmente são utilizados metanol, etanol, acetonitrila e acetona e os solventes extratores são os hidrocarbonetos halogenados como clorofórmio, diclorometano, clorobenzeno, tetracloreto de carbono e tetracloroetileno. As vantagens desta técnica incluem, simplicidade de operação, rapidez, baixo custo, alta recuperação do analito e alto fator de enriquecimento. Entretanto, a principal desvantagem é o uso de solventes tóxicos (hidrocarbonetos halogenados). Assim, o objetivo deste projeto é avaliar o uso de líquidos iônicos (IL, Ionic Liquids) como solvente extrator na DLLME (IL-DLLME) para a extração do omeprazol e seus metabólitos em amostras de plasma. Serão avaliados três líquidos iônicos obtidos comercialmente e por síntese orgânica: 1-butil-3-metilimidazólio hexafluorofosfato ([BMIM] [PF6]), 1-hexil-3-metilimidazólio hexafluorofosfato ([C6MIM] [PF6]) e 1-octil-3-metilimidazólio hexafluorofosfato ([C8MIM] [PF6]). Também serão avaliados outros parâmetros importantes que influenciam a extração: pH da fase aquosa, força iônica e tempo de centrifugação. Além disso, serão avaliadas duas técnicas de dispersão: a IL-DLLME assistida por ultrassom e a IL-DLLME assistida por vortex. Após todos os parâmetros terem sido avaliados e selecionada a condição que proporcionar maior recuperação dos compostos em questão e melhor seletividade, o método será validado e aplicado em amostras de pacientes submetidos à cirurgia bariátrica e que fazem uso deste fármaco.
Resumo em Inglês

Esta proposta tem como objetivo o desenvolvimento racional de plataforma contendo sistemas mucoadesivos de liberação tópico/local de fármacos na cavidade bucal. O estudo tem como ponto de partida a utilização de fármacos anestésicos com o intuito de substituir o anestésico injetável em procedimentos odontológicos. Serão desenvolvidos e comparados: i. comprimidos do tipo fast dissolve, ii. filmes e iii. sistemas semi-sólidos mucoadesivos. As formulações serão caracterizadas física e físico-quimicamente e serão realizados testes in vitro e ex vivo a fim de avaliar se as formulações apresentarão propriedades adequadas. Ademais, investigaremos o potencial da aplicação da iontoforese para modular a velocidade de liberação, permeação e manutenção do efeito do fármaco a partir dos filmes e formulações semi-sólidas. Em todos os casos, serão usadas ferramentas estatísticas para o planejamento e seleção das formulações com melhores características. Espera-se que no tempo estabelecido, o desenvolvimento desta proposta contemple: geração de conhecimento (Iniciação científica, Dissertação de Mestrado, Tese de doutorado); artigos científicos publicados em periódicos de circulação nacional e internacional; apresentação em reuniões de caráter científico; avanço tecnológico por meio do depósito de pedido de patente; formação de recursos humanos altamente qualificados na área Farmacêutica; fortalecimento e consolidação de equipe de pesquisa em área estratégica para o país.

A eletroforese capilar é uma técnica analítica de separação baseada nas diferenças entre as mobilidades de espécies carregadas, em uma solução de eletrólitos que pode ser aquoso ou orgânico, no interior de um pequeno capilar sob a influência de um campo elétrico. Dentre as principais vantagens da eletroforese capilar podem ser citadas: a alta eficiência, versatilidade, a demanda de pequenos volumes de amostra, o reduzido tempo de análise, o consumo mínimo de solventes, o baixo custo dos materiais de consumo, a possibilidade de interface com vários sistemas de detecção, e a simplicidade da instrumentação básica. Assim, devido à eficiência, seletividade e versatilidade, o presente projeto propõe demonstrar a aplicação dessa técnica em diferentes áreas. Neste sentido, está sendo proposta a análise enantiosseletiva da fluvastatina e seu principal metabólito em plasma, uma vez que ainda não existe método descrito na literatura para a análise deste fármaco por eletroforese capilar. Em outras aplicações, duas macromoléculas serão analisadas: o interferon-α (INF-α) e a α-1 glicoproteína ácida (α-1 AGP). A análise do INF-α, um biofármaco, será realizada em diferentes medicamentos comerciais com aplicação no controle de qualidade de biofármacos e a análise da α-1 AGP, um biomarcador, será realizada em plasma de pacientes internados no HCFMRP/USP com o objetivo de relacionar a concentração e estrutura desta glicoproteína nos diferentes estágios de desenvolvimento do estado inflamatório. Finalmente, também está sendo proposto o desenvolvimento e validação de um método para análise do mesilato de imatinibe e seu principal metabólito em plasma. O método será aplicado em amostras de plasma de pacientes portadores de leucemia mielóide crônica, em tratamento, para quantificação do fármaco e auxiliar no entendimento do mecanismo de resistência observado em alguns pacientes.

Proteínas são sintetizadas por todos os organismos vivos como parte de seu metabolismo natural. Algumas proteínas, tal como enzimas, servem como biocatalizadores e aumentam a taxa das reações metabólicas, enquanto outras formam o citoesqueleto. As proteínas representam um importante papel na sinalização de células, resposta imune, adesão celular e no ciclo celular. Elas podem ser comercialmente produzidas em indústrias com ajuda da biotecnologia (engenharia genética e engenharia de proteínas). Os produtos biotecnológicos vem ganhando destaque no campo farmacêutico, médico, de diagnósticos, alimentação, nutrição, entre outros. Mais de 300 milhões de pessoas, no mundo inteiro, têm sido beneficiadas pelo número crescente de fármacos produzidos por biotecnologia. Atualmente, os pacientes têm acesso a mais de 350 biofármacos, incluindo as vacinas. Um biofármaco bastante utilizado na terapia é o interferon alfa (IFN-α), uma citocina produzida por leucócitos, utilizada no tratamento de pacientes com hepatite B e C, leucemia mielóide crônica, entre outras enfermidades. Outra importante função de algumas proteínas é a de funcionar como biomarcador, sendo associadas com condições fisiológicas específicas, ou seja, sofrem uma mudança em sua concentração ou no seu estado de associação, de acordo com o processo biológico ou doenças. A α1-glicoproteína ácida (α1-AGP) é um biomarcador, cujo perfil biossintético no fígado sofre alteração devido ao desenvolvimento de uma resposta inflamatória sistêmica. As técnicas analíticas comumente empregadas para a análise destas biomoléculas são a cromatografia por exclusão molecular e por afinidade, cromatografia líquida de alta eficiência no modo de fase reversa (CLAE-FR), cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa, equilíbrio de diálise, imunoensaio e eletroforese em gel. Entretanto, estas técnicas consomem muito tempo e estão associadas à baixa sensibilidade para análise de proteínas. Uma alternativa para a aná

A eletroforese capilar é uma técnica analítica de separação baseada nas diferenças entre as mobilidades de espécies carregadas, em uma solução de eletrólitos que pode ser aquoso ou orgânico, no interior de um pequeno capilar sob a influência de um campo elétrico. Dentre as principais vantagens da eletroforese capilar podem ser citadas: a alta eficiência, versatilidade, a demanda de pequenos volumes de amostra, o reduzido tempo de análise, o consumo mínimo de solventes, o baixo custo dos materiais de consumo, a possibilidade de interface com vários sistemas de detecção, e a simplicidade da instrumentação básica. Assim, devido à eficiência, seletividade e versatilidade, o presente projeto propõe demonstrar a aplicação dessa técnica em diferentes áreas. Neste sentido, está sendo proposta a análise enantiosseletiva da fluvastatina e seu principal metabólito em plasma, uma vez que ainda não existe método descrito na literatura para a análise deste fármaco por eletroforese capilar. Em outras aplicações, duas macromoléculas serão analisadas: o interferon-α (INF-α) e a α-1 glicoproteína ácida (α-1 AGP). A análise do INF-α, um biofármaco, será realizada em diferentes medicamentos comerciais com aplicação no controle de qualidade de biofármacos e a análise da α-1 AGP, um biomarcador, será realizada em plasma de pacientes internados no HCFMRP/USP com o objetivo de relacionar a concentração e estrutura desta glicoproteína nos diferentes estágios de desenvolvimento do estado inflamatório. Finalmente, também está sendo proposto o desenvolvimento e validação de um método para análise do mesilato de imatinibe e seu principal metabólito em plasma. O método será aplicado em amostras de plasma de pacientes portadores de leucemia mielóide crônica, em tratamento, para quantificação do fármaco e auxiliar no entendimento do mecanismo de resistência observado em alguns pacientes.

Proteínas são sintetizadas por todos os organismos vivos como parte de seu metabolismo natural. Algumas proteínas, tal como enzimas, servem como biocatalizadores e aumentam a taxa das reações metabólicas, enquanto outras formam o citoesqueleto. As proteínas representam um importante papel na sinalização de células, resposta imune, adesão celular e no ciclo celular. Elas podem ser comercialmente produzidas em indústrias com ajuda da biotecnologia (engenharia genética e engenharia de proteínas). Os produtos biotecnológicos vem ganhando destaque no campo farmacêutico, médico, de diagnósticos, alimentação, nutrição, entre outros. Mais de 300 milhões de pessoas, no mundo inteiro, têm sido beneficiadas pelo número crescente de fármacos produzidos por biotecnologia. Atualmente, os pacientes têm acesso a mais de 350 biofármacos, incluindo as vacinas. Um biofármaco bastante utilizado na terapia é o interferon alfa (IFN-α), uma citocina produzida por leucócitos, utilizada no tratamento de pacientes com hepatite B e C, leucemia mielóide crônica, entre outras enfermidades. Outra importante função de algumas proteínas é a de funcionar como biomarcador, sendo associadas com condições fisiológicas específicas, ou seja, sofrem uma mudança em sua concentração ou no seu estado de associação, de acordo com o processo biológico ou doenças. A α1-glicoproteína ácida (α1-AGP) é um biomarcador, cujo perfil biossintético no fígado sofre alteração devido ao desenvolvimento de uma resposta inflamatória sistêmica. As técnicas analíticas comumente empregadas para a análise destas biomoléculas são a cromatografia por exclusão molecular e por afinidade, cromatografia líquida de alta eficiência no modo de fase reversa (CLAE-FR), cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa, equilíbrio de diálise, imunoensaio e eletroforese em gel. Entretanto, estas técnicas consomem muito tempo e estão associadas à baixa sensibilidade para análise de proteínas. Uma alternativa para a aná

Nos últimos anos, atenção especial vem sendo dada aos fármacos que possuem um ou mais centros de assimetria, ou seja, os fármacos quirais. Atualmente mais de 50% dos fármacos comercializados são quirais, isto é, misturas equimolares de dois enantiômeros. Devido às interações estereosseletivas dos enantiômeros com moléculas quirais presentes no sistema biológico, estes enantiômeros podem diferir na sua disposição cinética (absorção, distribuição, metabolismo e eliminação) e dinâmica (mecanismo de ação). Além disso, estudos mais recentes mostram diferenças estereosseletivas dos enantiômeros quanto à estabilidade frente a algumas condições como pH, luz, temperatura, solvente, tempo de estocagem, etc.
	Para atender a necessidade de se estudar estes enantiômeros separadamente, técnicas analíticas de resolução quiral vêm sendo desenvolvidas, dentre as quais destaca-se a cromatografia líquida de alta eficiência empregando fases estacionárias quirais e mais recentemente a eletroforese capilar. 
	Sendo assim, o projeto proposto tem por finalidade desenvolver novos procedimentos para análise enantiosseletiva da nitrendipina, nimodipina e nisoldipina empregando a cromatografia líquida de alta eficiência e a eletroforese capilar, bem como avaliar a estabilidade destes enantiômeros isolados e na mistura racêmica em diferentes condições como: exposição à luz, temperatura, pH e força iônica. Recursos: 1700,00

Nos últimos anos, atenção especial vem sendo dada aos fármacos que possuem um ou mais centros de assimetria, ou seja, os fármacos quirais. Atualmente mais de 50% dos fármacos comercializados são quirais, isto é, misturas equimolares de dois enantiômeros. Devido às interações estereosseletivas dos enantiômeros com moléculas quirais presentes no sistema biológico, estes enantiômeros podem diferir na sua disposição cinética (absorção, distribuição, metabolismo e eliminação) e dinâmica (mecanismo de ação). Além disso, estudos mais recentes mostram diferenças estereosseletivas dos enantiômeros quanto à estabilidade frente a algumas condições como pH, luz, temperatura, solvente, tempo de estocagem, etc.
	Para atender a necessidade de se estudar estes enantiômeros separadamente, técnicas analíticas de resolução quiral vêm sendo desenvolvidas, dentre as quais destaca-se a cromatografia líquida de alta eficiência empregando fases estacionárias quirais e mais recentemente a eletroforese capilar. 
	Sendo assim, o projeto proposto tem por finalidade desenvolver novos procedimentos para análise enantiosseletiva da nitrendipina, nimodipina e nisoldipina empregando a cromatografia líquida de alta eficiência e a eletroforese capilar, bem como avaliar a estabilidade destes enantiômeros isolados e na mistura racêmica em diferentes condições como: exposição à luz, temperatura, pH e força iônica. Recursos: 17000,00 (custeio e capital)

A trombose venosa profunda (TVP) é uma patologia muito comum que pode evoluir para embolia pulmonar ou insuficiência venosa crônica, podendo ser fatal. Seu tratamento utiliza terapia com anticoagulantes via parenteral e oral (para manutenção) que estão associadas a prejuízos bem documentados limitando seu uso, além de resultar em baixa adesão do paciente ao tratamento. Este trabalho visa à obtenção de sistemas de liberação para veiculação da heparina fracionada (HF) e a caracterização fisico-química utilizando técnicas de microscopia eletrônica de varredura e análise por dispersão de luz. Um sistema de liberação que proporcione um aumento da biodisponibilidade do fármaco com controle da sua biodistribuição, sem dúvida, traz efetiva contribuição científica na área. As micropartículas poliméricas possuem grande estabilidade, capacidade industrial e possibilitam ajustes para alcançar o perfil de liberação adequado e/ou o direcionamento para determinado sítio de ação. O objetivo é o desenvolvimento e a caracterização de micropartículas de copolímeros dos ácidos lático e glicólico (PLGA) para a veiculação da HF utilizada no tratamento da TVP. O estudo proposto compreende a encapsulação da HF em micropartículas de PLGA com determinação do rendimento do processo de encapsulação, a caracterização fisico-química das partículas com análise morfológica, determinação do tamanho e distribuição, o desenvolvimento de metodologia para análise da heparina por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e a avaliação in vitro do perfil de liberação.

Processo Fapesp nº00/06391-1

Tipo de Participação: Integrante

Processo nº521223/95-4

Tipo de Participação: Integrante

Processo Fapesp nº95/3697-2

Tipo de Participação: Integrante