Leandro Pires Araujo.

A microbiota é uma comunidade complexa de microrganismos que coexistem em associação com o corpo humano. O sistema imunológico é uma rede de células e moléculas que contribuem para o funcionamento e proteção do organismo. Sabe-se que a microbiota desempenha um papel fundamental na homeostase e na resposta imune do hospedeiro. Assim, a mucosa intestinal possui vários tipos de células da imunidade inata e adaptativa, que desempenham um papel essencial na distinção entre organismos comensais e patógenos. Além disso, o intestino contém seu próprio sistema nervoso, o sistema nervoso entérico, que participa da comunicação importante dentro do eixo intestino-cérebro. Recentemente, foi demonstrado o papel essencial da microbiota no eixo intestino-cérebro, modulando a função homeostática e a inflamação no sistema nervoso central. Dentro deste contexto complexo, o papel da resposta imune à microbiota é um fator crucial para a proteção e a homeostase do hospedeiro (2). As células linfoides inatas do tipo 3 (ILC3s) e as células T auxiliares CD4+ do tipo 17 (Th17) desempenham um papel importante na resposta a bactérias e na autoimunidade. Nesse contexto, o presente projeto tem como principais objetivos: 1) avaliar o papel de bactérias específicas e das ILC3s na geração de neuroinflamação, e 2) avaliar o efeito do sistema nervoso simpático (SNS) nas ILC3s durante a inflamação intestinal. Para alcançar esses objetivos, usaremos estratégias envolvendo a deleção de comunidades bacterianas ou a colonização de animais com bactérias específicas em camundongos germ-free (o laboratório em construção é financiado pela FAPESP) no desenvolvimento de encefalomielite autoimune experimental (EAE). Além disso, utilizaremos camundongos deficientes em ILC3s para avaliar a neuroinflamação no sistema nervoso central (SNC). As ILC3s expressam receptores adrenérgicos alfa-2a e alfa-1b (ADRA2 e ADRA1B) e podem responder a estímulos derivados do SNS. Portanto, trataremos farmacologicamente células ILC3 in vitro com agonistas e antagonistas dos receptores ADRA2A e ADRA1B e analisaremos o papel desses receptores na ativação e produção de citocinas pelas ILC3s. Além disso, geraremos camundongos com ausência específica de ADRA2A e ADRA1B nas ILC3s, chamados de camundongos Adra2a delta ILC3 ou Adra1b-delta ILC3, para avaliar a inflamação intestinal e a neuroinflamação na ausência de sinalização adrenérgica nas ILC3s. Esta investigação é crucial para entender como as ILC3s e a microbiota podem influenciar e potencializar a neuroinflamação. Além disso, é essencial compreender como a neuromodulação nas ILC3s pode alterar a inflamação intestinal e as doenças inflamatórias intestinais.

O rim foi o primeiro órgão a ser transplantado com sucesso. No entanto, uma importante barreira para os transplantes é o processo de rejeição, no qual o sistema imune do receptor reconhece o enxerto como estranho. Esta reação é um processo complexo, no qual a imunidade celular e os anticorpos circulantes atuam juntos para eliminar o tecido do doador. Os imunossupressores ciclosporina A (CsA) e tacrolimus (FK 506) têm sido utilizados como terapias imunossupressoras para os transplantes, impedindo a rejeição do tecido implantado. No entanto, esses fármacos apresentam nefrotoxicidade como efeito colateral, que se manifesta por alterações da função renal e fibrose intersticial irreversível. As nossas investigações administrando a proteína antiinflamatória anexina 1 (AnxA1) têm mostrado a sua participação ativa nos processos inflamatórios, particularmente inibindo a ação de células inflamatórias. O presente projeto propõe avaliar a ação da AnxA1 na nefrotoxicidade causada pela CsA e FK. Avaliaremos a função renal por meio da taxa de filtração glomerular, fluxo sangüíneo renal e resistência vascular renal, e frações de excreção de sódio e potássio. Analisaremos quantitativamente a infiltração de leucócitos na região córtico-medular renal e a expressão da proteína AnxA1 em tecido renal pela técnica de imuno-histoquímica e Western blotting. Além disso, serão realizadas dosagens dos níveis da citocina TGF-β no soro pela técnica de ELISA. Este estudo tem potencial de desenvolver novas terapias para minimizar os efeitos inflamatórios da CsA e do FK 506 no rim, com a possibilidade de proteção e aumento da sobrevida de rins transplantados.

A lesão por isquemia/reperfusão renal esta associada com a disfunção orgânica em transplantes renais, cirurgias de revascularização da artéria renal, nefrectomias parciais, bem como em tratamentos cirúrgicos de aneurisma da aorta supra-renal. Esta condição patológica é produzida por inúmeros eventos bioquímicos e celulares, incluindo a ?interação endotélio-leucócitos?. Uma vez no compartimento extravascular, os leucócitos são ativados, podendo, em determinadas condições, levar ao dano e morte teciduais. Recentemente, investigações farmacológicas demonstraram que a proteína anexina 1 (AnxA1) participa ativamente na isquemia/reperfusão (I/R), particularmente inibindo a ação de células inflamatórias. O presente projeto propõe avaliar o rim em modelo de I/R renal e, quantitativamente, os monócitos/macrófagos e linfócitos observados na região córtico-medular renal e no sangue de ratos Wistar machos, após o tratamento com AnxA1. Analisaremos no tecido renal e no sangue a expressão da proteína AnxA1 pela técnica de imunofluorescência e western blotting. Além disso, serão realizadas dosagens de sódio e potássio, e a titulação de creatinina urinária. O estudo dirigido aos mecanismos de ação da proteína AnxA1, em especial em relação à inibição do acúmulo ou à regulação da ativação de células inflamatórias, é um alvo importante para o desenvolvimento de novas terapias para minimizar os efeitos inflamatórios no rim, com a possibilidade de proteção e aumento da sobrevida do órgão nos transplantes renais.