Luciano Neder Serafini.

O presente Projeto contemplou uma parceria entre o Ministério da Saúde/Programa DST/AIDS, UNESCO e a Sociedade Brasileira de Patologia para o treinamento in loco de patologistas para a interpretação e diagnóstico das alterações cito-histopatológicas do tecido nervoso decorrentes à infecção crônica pelo HIV, dentre essas, o complexo AIDS/demência, bem como seus diagnósticos diferenciais. O mesmo foi desenvolvido em pólos regionais distribuídos em cursos de treinamento e capacitação teórico-prática de médicos patologistas nas regiões norte, nordeste, centro-oeste, sudeste e sul. O mesmo previu, por meio de cursos regionalizados e focados no diagnóstico precoce das principais patologias associadas/decorrentes da AIDS, realizar o treinamento in loco de patologistas, através de cursos teórico-práticos de curta duração. O público-alvo foi exposto às recentes mudanças do espectro das lesões neuropatológicas, tendo como base, conhecimentos epidemiológicos e peculiaridades de cada região. Ao final do treinamento, participaram mais de 450 profissionais da área da saúde, integrando patologistas das mais distintas regiões do país. Foram ministrados os seguintes Cursos em 2007:
1. Belém (PA) e Campo Grande (MS), 11 e 12 de maio.
2. Brasília (DF), 25 e 26 de maio.
3. Fortaleza (CE), 15 e 16 de junho.
4. Salvador (BA), 29 e 30 de junho.
5. São Paulo (SP), 21 e 22 de setembro.
6. Curitiba (PR), 28 e 29 de setembro.
7. Belo Horizonte (MG), 26 e 27 de outubro.
8. Rio de Janeiro (RJ), 9 e 10 de novembro.
9. Bento Gonçalves (RS), 16 e 17 de novembro.
Coordenadores
- Prof. Luciano Neder, USP-RP.
- Profa. Leila M C Chimelli, UFRJ
- Profa. Myriam Dumas Hanh, UFF
Valor total concedido: R$ 191.000,00.

O Projeto visa ao desenvolvimento de nanopartículas de baixo custo e que sejam capazes de carrear drogas sintéticas e biológicas, particularmente microRNAs, para o tratamento adjuvante dos gliomas de alto grau, que são os tumores primários intraparenquimatosos mais frequentes nos adultos. Os gliomas de alto grau (HGGs, do inglês high-grade gliomas) são representados pelos oligodendrogliomas e astrocitomas anaplásicos (grau III OMS ) e pelos glioblastomas (GBMs, grau IV OMS) que, apesar de todos os avanços no diagnóstico e tratamento (cirurgia, radioterapia e/ou quimioterapia), apresentam elevada morbiletalidade. Os GBMs permanecem como um dos tumores mais letais da espécie humana e caracterizam-se pela alta agressividade, baixa sobrevida (1,2 anos, em média) e resistência às modalidades terapêuticas vigentes. Por sua vez, os pacientes com astrocitomas anaplásicos (AAs) e os oligodendrogliomas anaplásicos (OGs III) apresentam maior sobrevida em comparação com os com GBMs, porém são invariavelmente fatais. Por se desenvolverem em microambiente tumoral pobre em nutrientes e com baixas tensões de oxigênio, propomos desenvolver estratégias que visem modular, de forma mais efetiva nos HGGs, a expressão de genes tumorais da via do fator induzido por hipóxia (HIF), relacionados à sobrevivência, migração e resistência celular. Para tanto, formou-se um grupo de estudo entre químicos, biologistas, médicos e patologistas que se propõem a unir conhecimentos e expertises a fim de utilizar moduladores de microRNAs que participam da via do HIF, uma das vias-chave na regulação das adaptações celulares à hipóxia e que participa no crescimento, sobrevivência e motilidade das células neoplásicas. Numa primeira etapa, serão sintetizadas e testados diversos sistemas nanoparticulados com composições químicas distintas, visando o melhor composição e design que garanta uma alta incorporação dos mesmos, pelas células neoplásicas de gliomas de alto grau, cultivadas em meio pobre de nutrientes e submetidas à hipóxia (1% O2). Dentro destes sistemas nanopartículados buscaremos os sistemas mais eficientes e os que foram capazes de atravessar a barreira hematoencefálica, já validados pelo nosso grupo. Numa etapa seguinte, serão inseridos os moduladores de microRNAs [anti-microRNAs (antagomiRs) e microRNAs-símile (miR-mimics)], com a finalidade de modular a expressão dos genes de interesse, que serão quantificados, validados e submetidos a avaliações funcionais. 
Com o desenvolvimento deste novo sistema de nanocarreadores, abrem-se amplas perspectivas para novas possibilidades de tratamento dos HGGs, através do uso de drogas biológicas e mesmo de outros compostos químicos, que podem ser utilizados de forma adjuvante ao tratamento convencional. Trata-se de uma abordagem inovadora de grande impacto cientifico e tecnológico. No âmbito da prática oncológica, respeitados os limites de extrapolação dos resultados para o âmbito humano, os resultados finais do estudo poderão incrementar o suporte à escolha de recursos terapêuticos baseados em terapia gênica. Assim, devido a obediência ao cronograma e à alocação dos recursos nesta fase, pretendemos, numa etapa posterior, testar os sistemas nanoparticulados mais eficientes em modelos animais de HGGs e otimizar a produção dos nanocarreadores, numa escala semipiloto, já em atividade no Departamento de Química da FFCLRP, que sejam de baixo custo e, portanto, acessíveis para os pacientes do Sistema Único de Saúde.

Galectinas são proteínas ligantes a carboidratos, representadas por quinze membros filogeneticamente conservados de L-lectinas encontradas em organismos multicelulares, de fungos a mamíferos. Dentre os diferentes tipos de galectinas, destaca-se a Galectina-3 (Gal-3) devido ao seu papel na tumorigênese, progressão, disseminação e sobrevivência das células neoplásicas. Descrevemos, juntamente com outros grupos de pesquisa, a Gal-3 como potencial biomarcador nos gliomas. Uma vez que a mesma apresenta-se diferencialmente expressa nos tumores astrocíticos de acordo com os seus diferentes graus de malignidade, a avaliação da expressão da Gal-3 mostrou-se útil na distinção entre os astrocitomas pilocíticos (grau I) e os astrocitomas difusos (grau II) e principalmente, entre os oligodendrogliomas anaplásicos (grau III) e glioblastomas (GBMs). Observamos que a expressão da Gal-3 não é homogênea nos GBMs, isto é, há uma maior expressão da lectina nas células neoplásicas, principalmente em nível citoplasmático e ao redor das áreas de necrose, nas pseudopaliçadas celulares - cujo significado biológico ainda não foi totalmente esclarecido. Uma das hipóteses é a de que as células das pseudopaliçadas sejam mais resistentes à apoptose e estejam em migração celular. Por outro lado, alguns resultados na literatura são conflitantes em relação à expressão da Gal-3 em gliomas difusos, possivelmente devido a diferentes clones de anticorpos e protocolos utilizados. Desta forma, torna-se necessário uma comparação sistemática e minuciosa da imunoexpressão da Gal-3 com anticorpos direcionados às suas diferentes regiões (porção C-terminal, NH-terminal e região transmembrânica). Com este Projeto, propomos avaliar, de forma sistemática e minuciosa, a expressão da Gal-3 por imuno-histoquímica numa série de GBMs, oligodendrogliomas anaplásicos, astrocitomas pilocíticos e ependimomas com o auxílio de arranjos de matrizes teciduais (TMA) com anticorpos direcionados a epitopos distintos da Gal-3. Pretendemos ainda realizar a avaliação concomitante da expressão da Gal-3 e de marcadores de migração celular, proliferação e de resistência à apoptose através de dupla-marcação. Assim, poderemos dar prosseguimento à linha de pesquisa sobre a Gal-3 em nosso meio, propiciando a investigação aprofundada deste biomarcador que tem se mostrado de grande auxílio no diagnóstico diferencial entre alguns tipos de gliomas. Adicionalmente, por tratar-se de proteína ligante a carboidratos, a Gal-3 possui as características de uma molécula transdutora de sinais celulares, tornando-se assim, potencial alvo terapêutico. A avaliação concomitante da expressão desta lectina e de outros marcadores celulares nos permitirá ainda obter maiores informações e inferências sobre o(s) seu(s) possível(s) papel(s) biológico(s) nos gliomas difusos.

Este estudo propõe analisar os processos moleculares e os mecanismos de contração muscular envolvidos na distrofia e as consequências do exercício físico na reabilitação do tríceps sural.

CNPq Proc. No. 486740/2013-7

Diferenças de assinatura de microRNAs (miRs) e estudo funcionais de genes associados ao câncer podem auxiliar no diagnóstico, prognóstico, sugerir funções e/ou participação de importantes vias com potencial de serem utilizadas como futuras terapias alvo para as neoplasias humanas. Este projeto pretende identificar a assinatura de miR em diferentes tumores pediátricos (leucemias linfóides agudas, tumores de sistema nervoso central e tumores adrenocorticais) e avaliar o perfil diferencial de expressão destes miRs em subgrupos específicos dentro destas neoplasias. Além disso, pretende estudar a função de genes que foram identificados em projetos anteriores do grupo, com potencial aplicação como genes candidatos a terapia alvo e possível aplicação em desenhos de protocolos de tratamento, especialmente para subgrupos de doença associadas a prognóstico desfavorável. Serão realizados estudos funcionais através de silenciamento e/ou ativação de expressão de genes, analisados por ensaios de citoxicidade, viabilidade e proliferação celular, apoptose e ciclo celular, incluindo os genes SHOC2 e XPO7 em linhagens celulares de leucemia linfóide aguda, TNFA e AURKB em linhagens de tumores adrenocorticais e genes VEGF e CA12 em linhagens de tumores astrocíticos e meduloblastomas. Até o momento o banco de tumores das instituições participantes conta com mais de 200 amostras de leucemia linfóide aguda, cerca de 60 amostras de tumores adrenocorticais infantis, 15 de adultos, cerca de 50 amostras de meduloblastoma, 50 de astrocitoma pilocítico, 50 de glioblastoma (crianças e adultos) e amostras de controle sem doença neoplásica (medula óssea, adrenal e cérebro).

Os gliomas difusos são os tumors cerebrais primários mais letais do SNC. Devido à intrínseca capacidade infiltrativa, a cura por ressecção cirúrgica não é uma opção viável e a maioria destes tumores são resistentes aos tratamentos radio e quimioterápicos. Um fator chave que contribui para esta refratariedade ao tratamento clínico é a heterogeneidade tumoral. Contudo, a classificação de alguns tumores cerebrais de acordo com os critérios da OMS permanece ainda inadequada quanto à sua reprodutibilidade entre os patologistas. Isto se deve à heterogeneidade tumoral e ao fato de que o diagnóstico histopatológico permanecer algo subjetivo. Adicionalmente, quando se trata de casos isolados, mesmo quando o diagnóstico é virtualmente concordante, o comportamento clínico previsto nem sempre condiz com a evolução clínica. Por outro lado, as opções de tratamento para os tumors gliais mais agresssivos têm se expandido, principalmente com o advento das terapias moleculares direcionadas (target therapies). Desta forma, a maioria das pesquisas do Translational Glioma Working Group do Hospital Geral de Massachusetts da Universidade de Harvard (MGH) tem focado os padrões de expressão gênica a fim de se obter subgrupos moleculares bem definidos de gliomas e de pacientes com relevância clínica, no que se refere à perspectiva terapêutica. O Grupo foi o primeiro a mostrar que classificações baseadas em arranjos de matrizes (arrays) são mais eficazes em diferenciar certos tipos de gliomas, como glioblastomas e oligodendrogliomas anaplásicos. A heterogeneidade intratumoral foi também investigada em diversos trabalhos através da análise padrões de expressão gênica, DNA e proteica. No presente projeto propomos realizar a validação de biomarcadores capazes de distinguir subgrupos de gliomas de alto grau em tecidos parafinados ou congelados através de imuno-histoquímica (IHQ) e, em certos casos, com o auxílio de RT-PCR quantitativo (qRT-PCR) e por estudos de hibridização in situ. Assim, preten

O estudo de novos marcadores moleculares envolvidos na progressão tumoral tem criado novas linhas de pesquisa, principalmente aquelas relacionadas à modulação/silenciamento gênico. Por regularem a expressão gênica através da clivagem de mRNAs ou mesmo pela repressão da tradução gênica, o estudo dos miRNAs tem suscitado grande interesse, particularmente devido a sua participação na oncogênese, sendo de grande valor na identificação de novos marcadores diagnósticos e na terapia do câncer. Os miRNAs são pequenas seqüências de RNAs regulatórios encontrados em plantas, insetos e em mamíferos. Os mesmos são precisamente regulados durante o neurodesenvolvimento, participando de diversas vias celulares regulatórias, relacionadas à proliferação, apoptose e migração celular, podendo se apresentar, funcionalmente, como ongenes ou genes supressores tumorais. O papel dos miRNAs em oligodendrogliomas ainda não foi estabelecido. Desse modo, o principal objetivo do presente trabalho é o de avaliar, através de microarrays, a expressão de mRNAs (41.000 genes) e miRNA (723 transcritos) em oligodendrogliomas de diferentes graus de malignidade (graus II e III, n = 8 por grupo) previamente microdissecados. Como controles serão utilizados fragmentos de substâncias brancas não-neoplásicas obtidas de pacientes operados por epilepsia do lobo temporal (n = 8). Por fim, pretendemos correlacionar a expressão dos miRNAs com os seus possíveis mRNAs complementares e validarmos tais achados por PCR em tempo real. Com este projeto, almejamos identificar miRNAs que possam ter participação na oncogênese, expandindo assim o conhecimento neste novo campo da biologia tumoral. Pretendemos ainda obter novos dados a respeito dos mecanismos moleculares envolvidos na progressão dos gliomas, bem como iniciar uma nova linha de pesquisa.

As alterações genético/moleculares associadas com o desenvolvimento e progressão de gliomas humanos têm sido intensivamente estudadas nos últimos anos. Embora os tipos das alterações moleculares e a prevalência das mesmas nos diferentes tipos de gliomas tenham sido bem caracterizadas, ainda persistem inúmeras questões em relação aos efeitos destas na patogênese e na determinação do valor prognóstico dos pacientes com glioma. Novos mecanismos envolvidos no comportamento biológico dos gliomas têm sido recentemente descritos. Um destes eventos é o Alternative Lengthening of Telomeres (Aumento Alternativos de Telômeros, ALTs). Células neoplásicas ALT-positivas caracterizam-se pela presença de marcada heterogeneidade no tamanho dos telômeros ? o que está associada a melhor prognóstico em vários tipos de cânceres. Estima-se que cerca de 12% de todos os tipos tumorais apresentam ALTs. O papel das ALTs nos gliomas ainda não foi completamente estabelecido, sendo que inexistem trabalhos na literatura que tenham avaliado o impacto da perda e ganho de material genético e do tamanho das regiões teloméricas em oligodendrogliomas e gliomas mistos, sobretudo nos de baixo grau ? sendo este um dos principais objetivos deste Projeto. Por outro lado, é fato bem estabelecido que a deleção 1p/19q, que pode estar presente em cerca de 2/3 dos oligodendrogliomas e em parte dos astrocitomas, associa-se a uma melhor resposta à quimioterapia e maior sobrevida. O presente projeto propõe-se a identificar a ocorrência da deleção 1p/19q do fenômeno de ALTs por FISH numa série de astrocitomas, oligoastrocitomas e oligodendrogliomas, em diferentes graus de malignidade e seu impacto na sobrevida - questão ainda em aberto na literatura.

Pesquisador Associado ao Projeto ?Análise da expressão gênica diferencial no hipocampo de pacientes com Epilepsia do Lobo Temporal?, sob coordenação da Profa. Dra. Maria Luisa Paçó-Larson (Depto. de Biologia Celular e Molecular da FMRP/USP), em desenvolvimento pelo aluno de Doutorado Daniel Leite Góes Gitaí, desde março de 2003.

O projeto conta com financiamento da FAPESP e o Ludwig Institute for Cancer Research que estão fianciando conjuntamente um programa de pesquisa que visa identificar alterações da expressão gênica em células neoplásicas em comparação com tecidos equivalentes normais, para correlacionar com dados da evolução clínica e resposta terapêutica. O programa está em pleno andamento, envolvendo 19 grupos clínicos e cirúrgicos do Estado de São Paulo, que já coletaram mais de 350 amostras de 8 tipos diferentes de tumores.
Consoante, o sucesso da fase laboratorial, de análise de expressão gênica, depende da extração de RNA de elevada qualidade de células tumorais e normais. Essa etapa exige a participação instensiva de um patologista, para selecionar as áreas de tumor nas amostras congeladas que devem ser estudadas, sendo essa a nosa participação até o 1o semestre de 2003.

Pesquisador Associado ao Projeto ?Expressão gênica em carcinomas espinocelulares de laringe?, sob orientação do Prof. Dr. Rui Celso Martins Mamede (Depto. de Oftalmologia, Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeça e Pescoço) e do Prof. Dr. Marco Antonio Zago (Depto. de Clínica Médica), em desenvolvimento pelo aluno de Doutorado David Livingstone, desde julho de 2002.

Pesquisador Associado ao Projeto ?Substratos Neuropatológicos e de Neuroimagem associados à Epilepsia do Lobo Temporal? -coordenador Prof. Dr. João Pereira Leite (processo FAPESP no1999/11729-2), aprovado em junho de 2000, com vigência até maio/2003 - Recursos: R$ 130.777,30 + U$$ 80.965,00 + aditivo de R$ 25.092,00).